青鳉Pod1基因的克隆及表達(dá).pdf

1、動(dòng)物的性別決定是自然界最令人注目的現(xiàn)象之一，也是生命科學(xué)中的一個(gè)重要的研究領(lǐng)域。Pod1基因作為bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族B組轉(zhuǎn)錄因子，參與哺乳類的調(diào)控神經(jīng)元發(fā)生、肌細(xì)胞生成、哺乳類的肌肉形成、性腺發(fā)育、性別決定和性別分化等。然而，至今為止，在非哺乳類脊椎動(dòng)物中，有關(guān)Pod1基因在性別分化和性腺發(fā)育過程功能方面的研究國(guó)內(nèi)外尚未見其它報(bào)道。我們利用模式動(dòng)物青鳉作為研究對(duì)象，獲得的主要結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)已知小鼠的Pod1基因序列預(yù)測(cè)青

2、鳉Pod1基因的序列并設(shè)計(jì)特異性引物，通過PCR技術(shù)克隆了Pod1基因的開放閱讀框，它包含516個(gè)堿基，編碼171個(gè)氨基酸。然后應(yīng)用3'race技術(shù)克隆了Pod1基因的3'端序列，其長(zhǎng)度大約為200bp。
　　2.利用生物信息學(xué)軟件分析了結(jié)構(gòu)的相似性，構(gòu)建了進(jìn)化樹。同線性分析顯示，青鳉的Pod1基因定位在24號(hào)染色體上，在人類中Pod1基因在6號(hào)染色體上。
　　3.提取了青鳉的各個(gè)組織的總RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條

3、鏈，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后通過瓊脂糖凝膠電泳分析檢測(cè)Pod1基因在成體青鳉不同組織中的表達(dá)分布情況，結(jié)果表明Pod1基因除了在性腺中表達(dá)外，還在心臟、腎臟、肝臟等組織中表達(dá)。
　　4.將Pod1基因連接到PQE-his-tag原核表達(dá)載體中，然后將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中表達(dá)Pod1基因的蛋白，經(jīng)SDS-PAGE膠進(jìn)行分析蛋白大小，證明蛋白表達(dá)正確。
　　總之，本文利用青鳉為模式動(dòng)物克隆了Pod1基因的ORF序列及3'端