禽大腸埃希菌不同CTX-M亞群的散播機(jī)制及遺傳特性.pdf

1、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extented spectrumβ-lactamases，ESBLs)是細(xì)菌對(duì)三代頭孢耐藥的主要機(jī)制，大腸埃希菌是ESBLs最主要的產(chǎn)生菌。ESBLs基因型有多種，近十年來(lái)，CTX-M型已逐漸代替TEM型和SHV型而成為散播最為廣泛的基因型。本試驗(yàn)旨在通過(guò)檢測(cè)不同來(lái)源雞源大腸埃希菌（分離自市售健康雞肉和疑似大腸埃希菌病死亡的病死雞肝臟）中CTX-M型ESBLs的分子流行特征基礎(chǔ)上，分析不同來(lái)源、不同亞群的b腸CTX

2、-M散播機(jī)制及遺傳背景，以期為臨床控制blaCTX-M的散播及防治產(chǎn)CTX-M型雞大腸埃希菌感染提供理論基礎(chǔ)。
　　用微量肉湯稀釋法測(cè)定106株雞大腸埃希菌（包括18株雞肉分離菌和88株病料分離菌）對(duì)氨芐西林、頭孢噻呋、頭孢噻肟、慶大霉素、阿米卡星、多西環(huán)素、氟苯尼考和恩諾沙星8種抗菌藥物的最小抑菌濃度(MIC)，結(jié)果顯示不同來(lái)源分離菌對(duì)藥物的耐藥特征相似，耐藥率均在18.2～94.4％。76株對(duì)三代頭孢耐藥的雞大腸埃希菌（包括1

3、0株雞肉分離菌和66株病料分離菌）的ESBLs檢測(cè)結(jié)果表明:10株雞肉分離菌中有5株菌攜帶blaCTX-M，檢出率為50％，其中4株為CTX-M-9亞群（3株blaCTX-M-14和1株blaCTX-M-65），1株為CTX-M-1亞群（1株blaCTX-M-55）。66株病料分離菌中有63株菌攜帶blaCTX-M，檢出率高達(dá)95.5％，其中屬于CTX-M-9亞群有25株(21株blaCTX-M-65和4株blaCTX-M-14)、CT

4、X-M-1亞群有23株（22株blaCTX-M-55和1株blaCTX-M-15）、兩種不同亞群雜合的有7株（4株blaCTX-M-64和3株blaCTX-M-123），此外尚有8株分離菌未確定具體的基因亞型。說(shuō)明目前河南省雞大腸埃希菌中攜帶的CTX-M基因主要屬于CTX-M-9亞群和CTX-M-1亞群。
　　采用PCR定位技術(shù)檢測(cè)不同亞群的blaCTX-M上、下游基因序列。結(jié)果顯示:不同亞群的blaCTX-M上游均含有ISEcp

5、1，但下游插入序列不同，其中CTX-M-1亞群、blaCTX-M-64和blaCTX-M-123的下游為ORF477，CTX-M-9的下游為IS903。此外，結(jié)果表明在CTX-M-9亞群中有高達(dá)80.5％的ISEcp1被其他插入序列截?cái)?，而CTX-M-1亞群中，僅有12.5％的ISEcp1被IS26所截?cái)?說(shuō)明CTX-M-9亞群的上、下游插入序列更易被IS26、IS10和其他未知插入序列截?cái)?，且下游插入序列結(jié)構(gòu)更復(fù)雜，其末端經(jīng)常有1個(gè)1

6、8bp的反向重復(fù)序列(IRL)。
　　質(zhì)粒不相容群結(jié)果顯示本批受試菌共檢出13種質(zhì)粒復(fù)制子類型，其中有67株菌(91.8％，67/73)的質(zhì)粒復(fù)制子類型不低于3種。不同blaCTX-M亞群的菌株攜帶質(zhì)粒復(fù)制子類型基本一致，且雞肉分離菌和病料分離菌攜帶的質(zhì)粒復(fù)制子無(wú)明顯差異。均為IncFII、IncK和IncFIB的檢出率最高，達(dá)82％～86％，均未檢出IncX、IncL/M、IncW、IncY和Inc FrepB復(fù)制子。說(shuō)明本批受

7、試菌多數(shù)均攜帶有多個(gè)質(zhì)粒復(fù)制子，有助于提高質(zhì)粒的宿主適應(yīng)性和耐藥基因的散播。結(jié)果顯示13株原保存菌與55株病料分離菌攜帶的復(fù)制子差異較明顯，其中IncFIA、IncA/C和IncT僅在病料分離菌中檢出，而IncI1和IncB在前者中的檢測(cè)率明顯高于后者。質(zhì)粒接合試驗(yàn)結(jié)果表明，63.0％(46/73)的產(chǎn)blaCTX-M菌株可以成功將耐三代頭孢菌素的耐藥質(zhì)粒傳遞給受體菌J53，其中5株雞肉分離菌的質(zhì)粒均全部發(fā)生了傳遞，13株原保存菌中有9

8、株菌質(zhì)粒發(fā)生了接合，接合率為69.2％;55株病料分離菌中有32株菌質(zhì)粒發(fā)生了接合，接合率為58.2％，三者之間無(wú)明顯差異。說(shuō)明接合性質(zhì)粒在CTX-M散播中發(fā)揮了重要的作用。
　　種系發(fā)育分型的結(jié)果顯示，73株產(chǎn)blaCTX-M的大腸埃希菌中，種系發(fā)育群A、B1、B2和D類的菌株比例分別為31.5％、46.6％、4.1％和17.8％。20株不產(chǎn)ESBLs的敏感大腸埃希菌屬于種系發(fā)育群A、B1、B2和D類的菌株比例分別為30％、65

9、％、0％和5％。其中在產(chǎn)CTX-M受試菌中，有21.9％菌株具有致病力，而不產(chǎn)ESBLs的敏感菌中僅有5％具有致病力，且高致病力菌株僅出現(xiàn)存產(chǎn)CTX-M菌中，說(shuō)明產(chǎn)CTX-M雞大腸埃希菌的致病力可能較不產(chǎn)酶的細(xì)菌強(qiáng)，但尚須進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí)。MLST結(jié)果顯示，73株產(chǎn)blaCTX-M大腸埃希菌中共檢出26個(gè)ST型，20株不產(chǎn)ESBLs菌株共檢出10個(gè)ST型，其中ST155和ST359在blaCTX-M菌株和不產(chǎn)ESBLs中均有檢出，且ST1

10、55在兩類細(xì)菌中的檢出率均最高。本批受試菌中共檢出10個(gè)新發(fā)現(xiàn)的ST型，其中ST4753中的fumC612和ST4752中的mdh382為發(fā)現(xiàn)的新的等位基因，相關(guān)序列均已提交至MLST數(shù)據(jù)庫(kù)。不僅說(shuō)明本批受試菌的親緣關(guān)系復(fù)雜，分屬于不同的克隆株，且變異速度快，也說(shuō)明克隆在CTX-M的散播中僅發(fā)揮了次要的作用。
　　綜上所述，目前河南省產(chǎn)CTX-M雞大腸埃希菌中流行的基因亞型以CTX-M-1亞群和CTX-M-9亞群為主，有少量的雜合