奶牛消化道內肽結合氨基酸的數(shù)量分布及其轉運載體表達的研究.pdf

1、十二指腸作為非腸系膜系統(tǒng)的成員之一，也屬于小腸的組成部分之一，其生成和吸收SNAN的能力對乳蛋白前體物的生成至關重要。至今，還沒有將瘤胃、瓣胃和十二指腸對小肽和游離氨基酸的生成和吸收能力進行比較的試驗研究。為此，本文針對瘤胃、瓣胃和十二指腸內的FAA-N和PBAA-N的含量及各部位粘膜上皮的APN、FAA轉運載體和小肽轉運載體PepT1的相對表達量進行了研究，初步闡明了乳蛋白前體物生成和吸收的主要部位。主要試驗結果如下:
　　試驗

2、一:為探索瘤胃、瓣胃和十二指腸中肽結合氨基酸和游離氨基酸濃度的分布。本試驗將6頭荷斯坦泌乳奶牛作為試驗對象，采取瘤胃、瓣胃和十二指腸內的食糜經離心預處理為澄清液體后，用氨基酸自動分析儀測定6N HCl水解前后的游離氨基酸(FAA)和總氨基酸濃度。試驗結果為，除了脯氨酸在瘤胃、瓣胃和十二指腸內的差異不顯著外(P＞0.05)，其余FAA-N均為十二指腸中的濃度顯著高于瘤胃和瓣胃中的濃度(P＜0.01)。所有FAA-N在瘤胃內的濃度均略低于在

3、瓣胃內的濃度。肽結合苯丙氨酸、肽結合組氨酸在瘤胃、瓣胃和十二指腸內的濃度差異不顯著(P＞0.05)，其余PBAA-N在十二指腸內的濃度顯著高于瘤胃、瓣胃(P＜0.01)。瓣胃內PBAA-N均略高于瘤胃內的濃度，且顯著低于十二指腸內的濃度(P＜0.01)。試驗結果表明，F(xiàn)AA-N和PBAA-N在瘤胃和瓣胃內的濃度顯著低于其各自在十二指腸內的濃度，說明FAA-N和PBAA-N在十二指腸中的生成量較高。
　　試驗二:為探索瘤胃、瓣胃和十

4、二指腸中小肽和游離氨基酸吸收的主要部位，本試驗將6頭荷斯坦泌乳奶牛作為試驗對象，采取瘤胃、瓣胃和十二指腸粘膜上皮組織，提取mRNA后應用實時熒光定量PCR測定氨基肽酶N(APN)、氨基酸轉運載體（ASCT2、y+LAT1、ATB0,+）和小肽轉運載體PepT1的表達量。設計適合奶牛的APN、FAA轉運載體的引物并檢驗其擴增效率，引用已經設計并驗證過的PepT1載體引物。應用實時熒光定量PCR儀測定各基因的相對表達量。APN、FAA轉運載

5、體經驗證擴增效率依次為，其可以用于實時熒光定量檢測基因的相對表達量。除了APN在瘤胃的表達量顯著高于瓣胃和十二指腸外(P＜0.05)，ASCT2、y+LAT1、ATB0,+的表達量均為十二指腸顯著高于瘤胃和瓣胃(P＜0.05)。PepT1的表達量從瘤胃到十二指腸依次升高，且十二指腸的表達量顯著高于瘤胃和瓣胃的表達量(P＜0.05)。試驗結果表明，在小肽的降解過程中，相比于十二指腸和瓣胃，瘤胃上皮細胞的APN降解能力可能更強;而氨基酸和小