枇杷己糖激酶調(diào)控糖積累的分子機(jī)制研究.pdf

1、枇杷原產(chǎn)我國，栽培歷史悠久。枇杷果實(shí)，形如黃杏、味道甘美、柔軟多汁、風(fēng)味甘甜、肉質(zhì)細(xì)膩。枇杷富含人體所需的各種營養(yǎng)元素，是營養(yǎng)的保健水果。但目前我國多數(shù)枇杷品種果實(shí)糖含量偏低，風(fēng)味較淡，對(duì)枇杷品質(zhì)造成了較大的影響。糖含量是果實(shí)品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，糖還有酸、類胡蘿卜素和其它營養(yǎng)成分及芳香物質(zhì)合成的基礎(chǔ)原料，糖含量直接影響果實(shí)食用價(jià)值及商品價(jià)值。因此，研究枇杷果實(shí)糖積累生理及分子機(jī)制，可以闡明果實(shí)糖調(diào)控機(jī)制，為提高枇杷果實(shí)品質(zhì)提供理論依據(jù)。

2、本研究以浙江農(nóng)林大學(xué)植物園成年枇杷樹(Eriobotryaj aponica(Thunb.) indl.)為試材，克隆了己糖激酶基因，研究該基因在枇杷果實(shí)發(fā)育過程中表達(dá)模式，研究了枇杷果實(shí)發(fā)育過程中己糖激酶活性與果實(shí)糖含量的變化關(guān)系，研究結(jié)果如下:
　　 利用RACE技術(shù)分離獲得了己糖激酶基因cDNA全長序列;克隆測序顯示己糖激酶基因全長1839bp;5'-UTR長度59bp;3'-UTR長度291bp; ORF長度為1491b

3、p;一共編碼497個(gè)氨基酸。枇杷cDNA全長序列與其他植物如橙、葡萄的同源性為72％-81％。通過Real-TimeRT-PCR分析枇杷幼葉、成熟葉、莖和花及枇杷果實(shí)不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)中己糖激酶基因的表達(dá)量。己糖激酶基因在枇杷花組織中具有較高的表達(dá)量;而在果實(shí)發(fā)育過程中，在花后30天的表達(dá)量較低，隨后迅速增高，在花后75天達(dá)到最大值，而后慢慢減低，直到果實(shí)成熟。
　　 以CaMV35S作為GFP蛋白的啟動(dòng)予，將ORFEjHXK1連

4、接到表達(dá)載體pCAMBIA-1302雙元載體的GFP編碼區(qū)的上游側(cè)，使用基因槍，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞，然后共焦顯微鏡下觀察到的GFP信號(hào)，共焦成像的GFP熒光顯示，35S:EjHXK1的-GFP融合蛋白主要在細(xì)胞膜上。通過HPLC法，對(duì)枇杷果實(shí)發(fā)育進(jìn)程中3種糖含量進(jìn)行了測定。在整個(gè)發(fā)育過程前期枇杷果實(shí)的糖主要以蔗糖為主，隨著成熟度的增加蔗糖含量呈逐漸減少的趨勢，但變化較平穩(wěn)。果實(shí)成熟前期葡萄糖和果糖的含量較低，在花后的75天，隨著