2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、博士學(xué)位論文學(xué)校代碼:l0023學(xué)號:b2007186PGC1Q調(diào)節(jié)黃體生成素和醛固酮合成以及葡萄糖激酶表達(dá)的分子機(jī)制研究研究生:朱繆孌導(dǎo)師:方福德教授常永生副教授學(xué)科專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向:2型糖尿病易感基因的研究入學(xué)時(shí)間:2005年9月所在院所:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博上學(xué)位論文第一部分PGC1僅協(xié)同SF1調(diào)節(jié)黃體生成素和醛固酮合成的研究摘要過氧化物酶體增殖激活受體丫共激活因子1a(PGC1僅)能共刺激多種轉(zhuǎn)錄因子

2、從而調(diào)節(jié)能量代謝進(jìn)程。核受體類固醇激素生成因子(SF1)在垂體、性腺、腎上腺等內(nèi)分泌組織中高表達(dá),轉(zhuǎn)錄調(diào)控多種關(guān)鍵基因,同時(shí)調(diào)節(jié)下丘腦垂體性腺軸多水平的激素合成。為探索PGC1Q在類固醇激素合成及垂體激素分泌中的作用,本課題以小鼠垂體促性腺Q(mào)T31細(xì)胞為研究模型,過表達(dá)PGC1a后,通過realtimePCR實(shí)驗(yàn)檢測到LHp和QGSU在mIⅢA水平的表達(dá)量升高,又進(jìn)一步通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)證明,PGC1a刺激0【T31細(xì)胞

3、分泌的黃體生成素增加。分析LHB啟動子序列,發(fā)現(xiàn)127bp—119bp位點(diǎn)存在一個(gè)SFl結(jié)合元件GSE(gor砌otropespecificelernem),突變該元件后,雙熒光報(bào)告實(shí)驗(yàn)證明SF1和PGC1a對LHp啟動子的刺激作用全部消失。染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證明PGC10【與SF1共定位在LHp啟動子區(qū)含GSE元件的區(qū)域,并促進(jìn)LHD轉(zhuǎn)錄。為進(jìn)一步證明PGC1a對SF1的共刺激作用,分析了二者相互作用的分子機(jī)制。哺乳動物雙雜交實(shí)驗(yàn)和免

4、疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明PGC1a與SF1能在體內(nèi)形成復(fù)合物,進(jìn)一步GSTpulldo、Ⅳn實(shí)驗(yàn)證明二者能直接相互作用。該作用發(fā)生在PGC1僅的N端1~180氨基酸區(qū)域(含LXXLL模體,142~146氨基酸)與SF1C端187~462氨基酸區(qū)之間。構(gòu)建不同長度的SF一1基因表達(dá)片段發(fā)現(xiàn),只有當(dāng)SF1的最適激活結(jié)構(gòu)域(proximlactivationdomain)和AF2結(jié)構(gòu)域同時(shí)存在時(shí),PGC1a和SF—l才能直接結(jié)合。腎上腺皮質(zhì)是最主要的

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