腦出血中PGC-1α的作用和機制.pdf

1、背景：腦出血是一種在腦實質中發(fā)生的血管性的自發(fā)性的出血，其急性期病死率高，至今發(fā)病的機制仍不太清楚，其治療手段也很有限。有研究表明血腫周圍帶的能量代謝障礙在腦出血中起著重要的作用。在生物體內，線粒體是供應能量的主要來源。在腦出血中，線粒體的功能和結構損傷與腦的能量代謝障礙直接相關。PGC-1α是核轉錄的共激活因子，對眾多生理功能都有重要的調節(jié)作用，例如促進線粒體的生物合成，調節(jié)糖代謝等。尤其是對能量平衡，PGC-1α起到了重要的調節(jié)作用

2、。在腦缺血中，PGC-1α參與了線粒體的生物合成和氧化應激，而線粒體的生物合成增多又促進了神經元的存活。在腦出血中其PGC-1α相關研究并不清楚。我們在本實驗中將探討PGC-1α在腦出血后的神經保護作用及其線粒體生物合成相關的保護機制。
　　目的：探討PGC-1α在大鼠腦出血后的保護作用和有關機制。
　　方法：運用大鼠自體股動脈血建立大鼠腦出血動物模型。將用于實驗的動物進行隨機分配，分組為：假手術組(sham group)、

3、腦出血組（ICH group）、ICH+非特異性siRNA組（ICH+nontrol siRNA group）、ICH+特異性siRNA組（ICH siRNA group）。腦出血組（ICH group）用微量注射泵在右側基底節(jié)處定向性注射50ul大鼠自體股動脈血，處理組于ICH模型前24h采用右側側腦室注射。討論PGC-1α在腦出血后是否對腦有保護作用及其可能的保護機制：（1）在建立大鼠腦出血模型后1h,6h,12h,24h,48h,

4、 and72h后，各個時間段的大鼠模型斷頭，提取不同腦部位的組織蛋白。運用Western blot蛋白印跡法檢測PGC-1α在大鼠腦出血后不同時間點的表達情況。大鼠腦出血后72h，提取大腦不同部位的腦組織蛋白。運用Q-PCR和Western blot測定PGC-1α在大鼠腦組織中不同部位的表達情況。（2）對Sham組、ICH組、ICH+nontrol siRNA和 ICH+siRNA組大鼠運用 Quantitative PCR及West

5、ern blot檢測PGC-1αmRNA和蛋白的表達,然后在不同時間點測定神經功能學的評分，在左右大腦半球測定大腦的含水量。（3）運用Western blot方法測定與線粒體生物合成相關蛋白（NRF1、TFAM、SOD2、UCP2）的情況。Quantitative PCR法檢測線粒體 DNA。高效液相色譜法(HPLC)檢測ATP的濃度。透射電鏡檢測線粒體的形態(tài)學及數(shù)量變化。
　　結果：（1）PGC-1α的表達在大鼠腦出血后增高，并

6、在72h明顯增高。PGC-1α的表達在大鼠腦出血同側紋狀體表達最明顯。
　?。?）同ICH nontrol siRNA組相比較，發(fā)現(xiàn)siRNA明顯抑制PGC-1α的mRNA及蛋白質的表達。 PGC-1αsiRNA能明顯降低神經功能評分和增加出血同側的腦含水量。
　?。?）腦出血后，線粒體生物合成相關蛋白（NRF1、TFAM、SOD2、UCP2）的表達、線粒體DNA的含量、線粒體的數(shù)量增高，干擾PGC-1α后，其均明顯減低，并