PGC-1α對(duì)鼠視網(wǎng)膜新生血管調(diào)控作用的研究.pdf

1、第一章，PGC-1α在鼠視網(wǎng)膜新生血管模型中的表達(dá)
　　目的:建立氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的模型，檢測(cè)正常鼠和氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管模型鼠的視網(wǎng)膜PGC-1α的表達(dá)，探討PGC-1α在小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成過(guò)程中的作用。
　　方法:將鼠齡7天(P7)的健康C57BL/6J小鼠共152只，隨機(jī)分成正常組(76只)和模型組(76只)，正常組在空氣環(huán)境中喂養(yǎng)，不做任何處理。模型組在(75±2)％的氧氣濃度的密閉氧艙中喂養(yǎng)，5天后鼠齡

2、12天(P12)時(shí)出氧艙，出艙后按時(shí)間點(diǎn)繼續(xù)在正常空氣環(huán)境中喂養(yǎng)，以建立氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管模型;正常組和模型組小鼠在鼠齡17天(P17)時(shí)行FITC-Dextran血管造影視網(wǎng)膜鋪片，觀察視網(wǎng)膜血管的形態(tài)和變化;石蠟組織切片H&E染色觀察突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)量。提取各鼠齡正常組和模型組小鼠的視網(wǎng)膜總RNA和總蛋白，采用Real-time PCR及Western blot技術(shù)檢測(cè)視網(wǎng)膜各時(shí)間點(diǎn)組織中PGC-1α的表達(dá)水

3、平。
　　結(jié)果:視網(wǎng)膜鋪片顯示:正常組小鼠視網(wǎng)膜血管清晰，走行規(guī)則，無(wú)新生血管生成;而模型組視網(wǎng)膜有大量新生血管生成及明顯的熒光素滲漏和無(wú)灌注區(qū)出現(xiàn);石蠟組織切片顯示:模型組中有大量的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞核突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜。模型組中視網(wǎng)膜PGC-1α mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而逐步上調(diào)，在P17時(shí)表達(dá)量上調(diào)明顯;
　　結(jié)論:在氧誘導(dǎo)的小鼠視網(wǎng)膜新生血管模型當(dāng)中，PGC-1α的表達(dá)量逐漸上調(diào)，其表達(dá)趨勢(shì)與視網(wǎng)膜

4、新生血管生成的時(shí)間基本同步。證明PGC-1α參與調(diào)控視網(wǎng)膜新生血管的形成過(guò)程。
　　第二章，PGC-1α siRNA調(diào)控鼠視網(wǎng)膜新生血管的形成
　　目的:檢測(cè)PGC-1α siRNA對(duì)視網(wǎng)膜新生血管形成的抑制作用，研究PGC-1α調(diào)控視網(wǎng)膜新生血管的作用，為視網(wǎng)膜新生血管性疾病提供新的治療靶點(diǎn)。
　　方法:將鼠齡7天(P7)健康的C57BL/6J小鼠共184只，隨機(jī)分成PGC-1α siRNA注射組(45只)、陰性對(duì)照

5、組(45只)、模型對(duì)照組(49只)、和正常組(45只)。正常組在空氣環(huán)境中喂養(yǎng)，不做任何處理。PGC-1α siRNA注射組、陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組小鼠放置于(75±2)％的氧氣濃度密閉艙中喂養(yǎng)5天，在鼠齡12天(P12)時(shí)出艙，出艙后繼續(xù)在空氣環(huán)境中喂養(yǎng)，建立氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管的模型;其中，PGC-1α siRNA注射組在P13時(shí)予以玻璃體腔內(nèi)注射1ul PGC-1αsiRNA-脂質(zhì)體混合物;陰性對(duì)照組則在P13時(shí)予以玻璃體腔注射

6、1ulsiRNA陰性對(duì)照-脂質(zhì)體混合物;模型對(duì)照組不做任何處理。各實(shí)驗(yàn)組在鼠齡17天(P17)時(shí)采用Real-time PCR和Western blot技術(shù)觀察小鼠視網(wǎng)膜PGC-1α mRNA、蛋白質(zhì)和VEGF mRNA、蛋白質(zhì)的表達(dá)變化;各組小鼠左心室行FITC-Dextran灌注并視網(wǎng)膜鋪片，觀察新生血管的形態(tài)和分布變化;視網(wǎng)膜石蠟組織切片H&E染色用以觀察并計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)量;免疫熒光檢測(cè)PGC-1α和VEG

7、F的表達(dá)。
　　結(jié)果:PGC-1α siRNA注射組的視網(wǎng)膜PGC-1α mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)與模型對(duì)照組相比分別下調(diào)了46.76％和47.67％，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); PGC-1α siRNA注射組視網(wǎng)膜VEGF mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)與模型對(duì)照組相比分別下調(diào)了48.84％和44.44％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);視網(wǎng)膜鋪片顯示:PGC-1α siRNA注射組與模型對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比較，視網(wǎng)膜新