Pannexins在大鼠腦出血中作用機(jī)制的研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 Pannexins在大鼠腦出血后腦組織中表達(dá)變化
　　目的:
　　探討Pannexins家族蛋白（包括Panxl，Panx2，Panx3）在大鼠腦出血(intracerebralhemorrhage，ICH)后腦組織中不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況。
　　方法:
　　選取42只成年雄性SD大鼠，隨機(jī)分為以下7個(gè)實(shí)驗(yàn)組:對(duì)照組、腦出血6小時(shí)組、12小時(shí)組，24小時(shí)組，48小時(shí)組

2、，72小時(shí)組，和1周組。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組各6只大鼠。通過立體定向儀引導(dǎo)將Ⅶ型膠原酶1微升注入大鼠右側(cè)尾殼核，建立實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠模型。模型建立后6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、1周分別將各組大鼠處死，取出大鼠雙側(cè)大腦皮層腦組織，用Western blot及免疫熒光等實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)Pannexins家族蛋白在腦出血后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　大鼠腦出血后腦組織中Panx蛋白表達(dá)。

3、>　　1.Western blot結(jié)果顯示:Panx1在對(duì)照組及ICH各時(shí)間點(diǎn)組大鼠腦組織中均有表達(dá)。Panx1在ICH后48小時(shí)表達(dá)水平達(dá)到高峰;與對(duì)照組相比較，Panx1在ICH后48小時(shí)及72小時(shí)表達(dá)水平顯著增高(P＜0.01)，在ICH后1周表達(dá)水平明顯增高(P＜0.05)。Panx2及Panx3在對(duì)照組及ICH各時(shí)間點(diǎn)組大鼠腦組織中也均有表達(dá)，但對(duì)照組與ICH各個(gè)時(shí)間點(diǎn)組的Panx2及Panx3表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.

4、05)。
　　2.免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)， Panx1蛋白在ICH組的表達(dá)水平呈現(xiàn)隨腦出血時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增高趨勢(shì)，并在腦出血后48h達(dá)到高峰。而Panx2、Panx3蛋白在ICH各時(shí)間點(diǎn)組中的表達(dá)水平與對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.Panx1在大鼠腦出血后表達(dá)水平明顯升高，在腦出血后48小時(shí)其表達(dá)水平達(dá)到高峰。
　　2.Panx2、Panx3在ICH后腦組織中表達(dá)水平無明顯變化（無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異）。<

5、br>　　第二部分 生胃酮對(duì)大鼠腦出血后細(xì)胞凋亡和變性干預(yù)作用研究
　　目的:
　　建立大鼠ICH模型，以生胃酮(carbenoxolone，CBX)處理，探究CBX對(duì)大鼠ICH后繼發(fā)性腦損傷及認(rèn)知功能障礙的作用。
　　方法:
　　選取24只成年雄性SD大鼠，隨機(jī)分為以下四組:對(duì)照組、ICH組、ICH+CBX低劑量干預(yù)組(10mg/kg)和ICH+CBX高劑量干預(yù)組(20mg/kg)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組各6只大鼠。通過立

6、體定向引導(dǎo)將Ⅶ型膠原酶1微升注入大鼠右側(cè)尾殼核，建立實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠模型。在CBX干預(yù)組，模型建立后1小時(shí)腹腔注射CBX溶液(低劑量組10mg/kg及高劑量組20mg/kg)。ICH動(dòng)物模型建立完成后第47小時(shí)開始對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，第48小時(shí)處死各組大鼠，取出大鼠出血側(cè)大腦皮層腦組織。用Western blot測(cè)定血清白蛋白及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的表達(dá)情況，采用TUNEL熒光染色與FLUORO-JADE B染色檢

7、測(cè)大鼠腦出血周圍組織神經(jīng)元細(xì)胞凋亡及變性情況。
　　結(jié)果:
　　大鼠神經(jīng)功能評(píng)分:對(duì)照組SD大鼠的活動(dòng)及食欲正常。ICH組SD大鼠精神萎靡，毛發(fā)蓬亂，攝食欲望較低，呈頭低位蜷縮狀，活動(dòng)減少。CBX干預(yù)組SD大鼠的活動(dòng)及食欲較ICH組均明顯改善。ICH組SD大鼠神經(jīng)功能評(píng)分較正常組顯著升高(P＜0.01)，CBX低劑量干預(yù)組SD大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯低于ICH組(P＜0.05)，CBX高劑量干預(yù)組SD大鼠神經(jīng)功能評(píng)分顯著低于IC

8、H組(P＜0.01)。腦水腫測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果:與對(duì)照組比較， ICH組SD大鼠腦水含量百分比明顯增高(P＜0.05)，CBX低劑量干預(yù)組SD大鼠腦水含量百分比明顯低于ICH組(P＜0.05)，CBX高劑量干預(yù)組大鼠腦水含量百分比顯著低于ICH組(P＜0.01)。Western blot結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，Active-Caspase3及Albumin在ICH組中表達(dá)水平均有明顯增高(P＜0.05);而與ICH組相比，Active-Cas

9、pase3及Albumin在CBX高劑量干預(yù)組中表達(dá)水平均有明顯下降(P＜0.05)，但是在CBX低劑量干預(yù)組中其表達(dá)水平無明顯變化(P＞0.05)。TUNEL熒光染色試驗(yàn)結(jié)果:與對(duì)照組比較，ICH組SD大鼠腦組織神經(jīng)元凋亡率顯著增高(P＜0.01)，CBX低劑量干預(yù)組神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率明顯低于ICH組(P＜0.05)，CBX高劑量干預(yù)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率顯著低于ICH組(P＜0.01)。FLUORO-JADE B染色試驗(yàn)結(jié)果:與對(duì)照組比較，