生防細(xì)菌ML12反應(yīng)調(diào)控因子Gac4及小RNA CsrB的生理功能及生防調(diào)控解析.pdf

1、水生拉恩氏菌（Rahnella aquatilis）ML12分離于自然土壤中，對(duì)多種病原細(xì)菌和真菌有拮抗作用，是一株很有潛力的生防細(xì)菌。前期完成了雙因子調(diào)控系統(tǒng)GacS/GacA中的反應(yīng)調(diào)控因子gacA和非編碼小RNA csrB在ML12基因組中的定位，本論文主要研究這兩個(gè)基因在生防功能上的調(diào)節(jié)機(jī)制。此外，對(duì)相關(guān)的細(xì)菌生長(zhǎng)、生物膜形成、泳動(dòng)和群集、溶磷作用、植物促生、生防等生理性狀進(jìn)行了分析。
　　 第一步，通過(guò)無(wú)標(biāo)記交換突變敲

2、除gacA以及csrB非編碼小RNA，得到ML12△gacA和ML12△csrB突變體。首先，確定gacA和csrB在細(xì)菌染色體上的定位及編碼特征。將目的基因兩端側(cè)翼片段插入自殺載體pSR47s中得到pSR47s-gacA和pSR47s-csrB，經(jīng)兩次同源重組和DNA測(cè)序鑒定，得到gacA和csrB缺失突變體。其次，以野生菌ML12為對(duì)照，比較突變體與野生菌表型和生防效果差異（菌落形態(tài)、泳動(dòng)和群集、生物膜形成、抗菌物質(zhì)和生防效果等），

3、分析gacA和小RNA csrB在細(xì)菌ML12中的作用。
　　 結(jié)果顯示:ML12△gacA、ML12△csrB泳動(dòng)速度慢于野生菌ML12，32h后泳動(dòng)圈直徑減小25％。ML12△gacA突變體喪失了群集能力。ML12△csrB生物膜形成量約是野生菌兩倍，ML12△gacA生物膜形成量下降13.2％。ML12△gacA、ML12△csrB突變體溶磷圈直徑減小20％。用ML12△gacA、ML12△csrB菌液處理的向日葵與野生菌

4、處理的相比鮮重分別下降30％和18％。雙層平板抑菌結(jié)果顯示ML12△gacA突變體對(duì)根癌菌C58抑菌圈直徑減小81.8％。ML12△gacA、ML12△csrB對(duì)番茄灰霉的抑菌圈直徑分別減小37％和16％。
　　 生防細(xì)菌發(fā)揮生防功效受多種因素影響，功效表現(xiàn)不穩(wěn)定性制約了生防細(xì)菌的應(yīng)用。本論文結(jié)果探明了gacA雙因子調(diào)控系統(tǒng)和小RNA csrB分子在生防細(xì)菌水生拉恩氏菌中的調(diào)控特征，明確了其在細(xì)菌發(fā)生生防功能的正向調(diào)控，為生防菌