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1、假單胞菌株G5是分離自香菜(Coriandrum sativum L.)莖內(nèi)的一株內(nèi)生菌,通過16S rDNA序列同源性分析及BIOLOG系統(tǒng)分析其底物利用圖譜,暫定Pseudomonas G5菌株為綠針假單胞菌屬桔黃亞種P.chlororaphissubsp.aurantiaca。在本研究中,菌株G5可產(chǎn)生多種次生代謝物質(zhì),如吩嗪衍生物、氫氰酸(HCN)、嗜鐵素和蛋白酶等。高效液相色譜(HPLC)方法鑒定菌株G5能夠產(chǎn)生植物生長素(I
2、AA),在溫室生測試驗中,以菜豆作為試驗植株,G5對菜豆表現(xiàn)出很好的促生作用。平板對峙測定結(jié)果表明,菌株對多種植物病原菌具有明顯的拮抗作用:溫室生測試驗結(jié)果表明,G5對菜豆灰霉病和立枯病有較好的防治效果。 本研究組合應(yīng)用AHLs檢測菌株Chromobacterium violaceum CV026和薄層層析分析,初步檢測出G5可產(chǎn)生幾種可檢測水平的AHLs信號分子,其中以N-hexanoyl-homoserine lactone
3、(C6-HSL,HHL)為主,遷移率Rf值為0.4。進一步克隆和測序了該菌株中有PhzI和PhzR組成的群體感應(yīng)quorum sensing系統(tǒng)的編碼基因phzIR,并在大腸桿菌中異源表達了AHLs信號分子合成酶基因phzI。序列和系統(tǒng)進化分析結(jié)果表明,它們與假單胞菌屬其它的phzIR基因有高度同源性和進化上的保守性。 在本研究中,運用miniTn5轉(zhuǎn)座子插入隨機突變的方法構(gòu)建突變體,通過報告菌株Chromobacterium
4、violaceum CV026平板劃線檢測,篩選出G5的信號分子缺失的突變株(G5-6),經(jīng)過PCR和測序鑒定其插入位置,已經(jīng)確認(rèn)插入位置在gacA基因內(nèi)。通過對野生菌G5和突變體G5-6的生防功能分析,發(fā)現(xiàn)gacA基因與抗菌代謝物HCN、嗜鐵素、蛋白酶的產(chǎn)生有關(guān)。同時,也與細菌泳動和群集運動能力,生物膜(biofilm)的形成、菜豆根部的定殖、平板抑菌效果等密切相關(guān)。其中對嗜鐵素和biofilm的形成是一種負調(diào)控,突變體的形成量明顯大
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