基因組重排技術在草菇耐低溫菌株選育上的應用.pdf

1、草菇(Volvariella volvacea)作為一種大面積栽培的食用菌,存在著不耐低溫的問題:在4℃條件下保存時,菌絲體會發(fā)生自溶而死亡,子實體會發(fā)軟、液化直至腐爛,這給草菇菌種的保存和產(chǎn)后的保鮮帶來了極大的困難。本文首次通過基因組重排技術,采用雙親滅活標記,經(jīng)過低溫篩選成功選育出3株正常出菇的草菇耐低溫菌株。
　　本文通過對草菇原生質體制備和再生條件的優(yōu)化、草菇突變體庫的構建、雙親滅活遞歸式原生質體的融合、耐低溫重排子的篩選

2、,獲得如下主要研究結果:
　　1.研究并建立了草菇原生質體的制備和再生的最佳條件。最優(yōu)的原生質體制備條件:選擇培養(yǎng)60h的草菇菌絲,在溶壁酶濃度為1.5％,酶解溫度32℃條件下酶解3h,并以0.6mol/L的甘露醇為滲透壓穩(wěn)定劑;最優(yōu)的再生條件為:選擇培養(yǎng)84h的草菇菌絲,在溶壁酶濃度為1.5%條件下酶解2h,并以0.6mol/L的甘露醇為滲透壓穩(wěn)定劑配制再生培養(yǎng)基,于32℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2.采用紫外誘變、化學誘

3、變、電子束誘變和60Co-g誘變這4種誘變方法分別對16個草菇原始菌株(耐低溫:0℃,10h)進行誘變,通過耐低溫處理和穩(wěn)定性實驗,最終篩選得到一個耐低溫效果明顯提高且擁有194個突變株的突變庫,耐低溫性達到0℃,24h,是原始菌株耐低溫性的2.4倍。
　　3.通過對草菇原生質體滅活條件的研究,最終確定原生質體熱滅活的條件為50℃,3min,紫外滅活時間為110 s;然后對這兩組滅活的原生質體進行PEG融合并對融合條件進行優(yōu)化,得

4、到最優(yōu)的融合條件:PEG濃度為40%,pH8.0,在32℃條件下融合30min,融合率達到0.517%。
　　4.經(jīng)過4輪基因組重排,篩選得到耐低溫(0℃,48h)的第四代重排株15株(F4),其耐低溫性是原始菌株的4.8倍;并對其中遺傳穩(wěn)定性較好的9株進行出菇實驗,最后成功出菇3株,其子實體在10℃條件下儲藏期分別為25 h、32 h、48h,是原始菌株中最耐低溫的V23儲存期的1.56、2.00、3.00倍。
　　由此可