Hippo通路與自噬共調節(jié)IUGR新生仔豬肝臟代謝的機理研究.pdf

1、宮內發(fā)育遲緩(Intrauterine growth restriction，IUGR)是指哺乳動物妊娠期胚胎或者胎兒及其器官的發(fā)育受阻。作為哺乳動物中普遍存在的圍產(chǎn)期并發(fā)癥，IUGR因為其較高的致病率與致死率、較低的食物利用率以及對胎兒長遠的負面影響，一直是人類健康及動物生產(chǎn)中的一個嚴重問題，但由于對其發(fā)生機制的不甚了解，IUGR的治療和預防仍然不足，因此充分了解IUGR的發(fā)生及調控機制具有重要意義。Hippo信號通路是一條新發(fā)現(xiàn)的信

2、號通路，在調控動物器官大小及細胞生長發(fā)育方面發(fā)揮著重要作用;自噬在動物早期發(fā)育及應激條件下的生理意義為人們熟知。本研究旨在探討Hippo信號通路及自噬是否參與調控IUGR新生仔豬肝臟的生長代謝，并初步闡明其作用機理，為深入了解IUGR提供理論依據(jù)。
　　 本研究分析了IUGR對新生仔豬肝臟生長代謝的影響，并通過分子生物學與細胞生物學實驗技術檢測了Hippo信號通路、自噬及其相關信號通路在IUGR新生仔豬肝臟中的表達規(guī)律。取得的主

3、要結果如下:
　　 (1)IUGR新生仔豬肝臟重量與體重比值顯著低于正常新生仔豬(P＜0.05)，表明了IUGR發(fā)生時，肝臟發(fā)育受阻;血漿游離氨基酸中，BCAA與AAA的比值相比于正常新生仔豬顯著降低(P＜0.05)。對IUGR新生仔豬肝臟進行H&E染色，發(fā)現(xiàn)染色異常，胞質空泡化，細胞排列紊亂。上述結果均提示IUGR新生仔豬肝臟的損傷;IUGR新生仔豬肝臟相比正常新生仔豬，能量代謝異常，表現(xiàn)為:血漿中葡萄糖濃度極顯著降低(P＜0

4、.01)，肝糖原明顯減少，能量代謝相關蛋白AMPK的活性極顯著升高(P＜0.01)。
　　 (2)通過Western blot與免疫組織化學試驗檢測了Hippo信號通路在IUGR新生仔豬肝臟中的活性升高，其中，相比正常新生仔豬，IUGR新生仔豬肝臟中MST與LATS1的活性極顯著升高(P＜0.01)，YAP的活性極顯著降低(P＜0.01)。
　　 (3)通過Western blot與透射電鏡試驗檢測了自噬在IUGR新生仔

5、豬肝臟中的活性降低。透射電鏡檢測了IUGR新生仔豬肝臟中自噬泡數(shù)量極顯著降低(P＜0.01)，Western blot試驗進一步說明了IUGR新生仔豬肝臟中自噬活性的降低（P＜0.01）。
　　 (4)通過Western blot試驗檢測了Hippo、自噬的相關信號通路Wnt/β-catenin與mTOR的活性極顯著降低(P＜0.01)，同時也發(fā)現(xiàn)了IUGR新生仔豬肝臟中Wnt/β-catenin信號通路的Dv12蛋白發(fā)生聚集，

6、表達量極顯著升高(P＜0.01)。
　　 (5)為了探討IUGR新生仔豬肝臟中自噬活性降低的調控機制，通過Westernblot試驗檢測了mTOR-AMPK-ULK1的相互作用，發(fā)現(xiàn)在IUGR新生仔豬肝臟中，ULK1在Ser555位點的磷酸化水平極顯著降低(P＜0.01)，而Ser757位點在兩組中都未發(fā)現(xiàn)磷酸化，表明了AMPK與ULK1相互作用可能存在缺陷。
　　 綜合上述試驗結果，得出以下結論:相比于正常新生仔豬，I