條斑紫菜(Pyropia-Porphyra yezoensis)病原學(xué)研究及瓊膠降解菌篩選.pdf

1、條斑紫菜(P.yezoensis)是紅藻門的代表性物種之一，對(duì)其起源進(jìn)化和環(huán)境脅迫適應(yīng)機(jī)制等科學(xué)問題的關(guān)注，使其成為藻類模式物種之一，具有重要的科研價(jià)值。條斑紫菜自然分布于西北太平洋沿岸潮間帶，是冬春季的優(yōu)勢(shì)物種之一，具有重要的生態(tài)價(jià)值。目前，條斑紫菜在中國、日本和韓國被大規(guī)模栽培，年產(chǎn)值達(dá)數(shù)十億美元，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但近年來，隨著條斑紫菜栽培規(guī)模的持續(xù)擴(kuò)大，病害發(fā)生的頻率、規(guī)模和危害程度也逐年增加，對(duì)條斑紫菜病害進(jìn)行病原學(xué)和致病條

2、件的研究，不僅可以為制定病害防治措施提供依據(jù)，而且也將為抗病品系的篩選提供條件。本論文從分離紫菜病原菌，深入研究其致病原因以及各環(huán)境因子對(duì)病害發(fā)生的影響。
　　 綠斑病是條斑紫菜配子體幼體時(shí)期的常見病害。本論文通過分離、培養(yǎng)、回感確證了綠斑病病原菌，分子生物學(xué)及生理生化特征鑒定結(jié)果表明其病原為Pseudoalteromonas carrageenovora，該病原菌為革蘭氏陰性桿菌，具有很高的蛋白酶活性和脂酶活性，此外多種芳胺酶

3、反應(yīng)為陽性。研究發(fā)現(xiàn)該病原菌致病性與環(huán)境因素相關(guān)，結(jié)果顯示溫度以及紫菜養(yǎng)殖密度對(duì)病情的蔓延影響較大，高溫以及高密度養(yǎng)殖會(huì)加速綠斑病病情的發(fā)展，而海水比重在一定范圍內(nèi)變化不影響該病的發(fā)生。
　　 赤腐病是條斑紫菜生產(chǎn)最嚴(yán)重的病害之一。本研究以疑似感染赤腐病的條斑紫菜為材料，觀察了病斑組織的細(xì)胞學(xué)和亞顯微結(jié)構(gòu)，通過分離、培養(yǎng)、回感確證了病原菌，并進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定。觀察發(fā)現(xiàn)，患病葉狀體上可見大小不一的病斑，病斑中央部分呈淺綠色，周

4、圍紅色，靠近未感染部位呈一圈鮮紫紅色。光學(xué)顯微鏡觀察，可見病斑處細(xì)胞已經(jīng)失去正常細(xì)胞的形態(tài)而被菌絲串聯(lián)在一起，此特征與赤腐病病癥類似。對(duì)分離培養(yǎng)的病原菌進(jìn)行ITS序列分析，結(jié)果顯示該真菌為交鏈孢霉菌(Alternaria sp.)，與典型赤腐病病原菌并不一致。
　　 藻類病原菌通常具有分解海藻膠的能力，本研究從不同海藻的腐爛材料以及海參腸道中分離純化瓊膠降解菌，開展了菌株鑒定、培養(yǎng)條件優(yōu)化、產(chǎn)瓊膠酶條件優(yōu)化和瓊膠酶基因克隆等研究

5、。通過初篩、復(fù)篩共獲得4株具有較高瓊膠降解能力的細(xì)菌HD、JL、QJ和HS。相對(duì)粗酶活力測(cè)定結(jié)果顯示，4-株瓊膠降解菌在2216E海水培養(yǎng)基中產(chǎn)酶狀態(tài)最好，菌株產(chǎn)酶的最佳條件與最適生長條件一致，4株菌瓊膠酶最大相對(duì)酶活力相近，且胞外酶活力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于胞內(nèi)酶，一般在培養(yǎng)36h后酶活力達(dá)到最大。經(jīng)鑒定，4株菌均為革蘭氏陰性菌，呈桿狀。16SrDNA序列分析顯示菌株HD、JL和HS屬于噬瓊膠菌屬Agarivorans sp.，而菌株QJ該基因序列