豬前體脂肪細胞的誘導分化及13個群體AFLP多態(tài)性研究.pdf

1、本論文對萊蕪豬前體脂肪細胞的誘導分化和13個中外豬種(群)的AFLP多態(tài)性進行了研究。
　　 脂肪沉積性狀是豬的重要經(jīng)濟性狀，與豬肉品質(zhì)密切相關(guān)。前脂肪細胞是一類具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化細胞，對其增殖和分化機理的深入研究有助于了解脂肪沉積的調(diào)控機理。萊蕪豬具有較強的脂肪沉積能力，其肌內(nèi)脂肪含量豐富。本研究采集1日齡萊蕪豬仔豬頸、背部皮下脂肪組織，采用膠原酶與胰蛋白酶相結(jié)合的方法，分離原代前體脂肪細胞，進行前體脂肪細胞

2、的原代和傳代培養(yǎng)，并進行前體脂肪細胞誘導分化的研究，以Real－time PCR技術(shù)檢測了前體脂肪細胞分化過程中關(guān)鍵基因PPARγ的表達。結(jié)果表明：分離的豬原代前體脂肪細胞約8h后開始貼壁，貼壁的細胞呈短梭形或不規(guī)則的三角形，第3天多數(shù)細胞進入指數(shù)生長期，呈成纖維細胞樣形態(tài)，細胞生長曲線近似S形；誘導培養(yǎng)結(jié)果顯示，少量細胞在第2天開始出現(xiàn)脂滴，多數(shù)細胞在第3天出現(xiàn)脂滴，第7～8天小脂滴開始逐漸融合成較大脂滴，在第12天左右融合成大脂滴，

3、油紅O染色呈橘紅色。在前體脂肪細胞分化過程中PPARγ基因mRNA的表達量逐漸增加，在誘導后的48h表達量最高，隨后其表達豐度逐漸下降。本實驗成功建立了萊蕪豬前體脂肪細胞培養(yǎng)體系和體外誘導分化模型，為進一步研究萊蕪豬前體脂肪細胞增殖與分化機制和豬體脂肪的沉積奠定基礎(chǔ)。
　　 用12對AFLP引物組合檢測了13個中外豬種(群)混合基因組DNA的遺傳變異，并根據(jù)AFLP分析結(jié)果計算了13個豬種(群)間的遺傳相似系數(shù)，據(jù)此構(gòu)建了UPG

4、MA聚類關(guān)系圖。結(jié)果表明，AFLP標記有著很高的多態(tài)檢測效率，平均每對引物檢測到76個多態(tài)位點，多態(tài)性比例為41.99％；觀測的最高等位基因為1.6056，最低為1.2899，平均觀測等位基因數(shù)目為1.4632；有效等位基因最高為1.4282，最低為1.2050,平均有效等位基因為1.3276；平均Nei基因多樣度(H)為0.1919，平均信農(nóng)指數(shù)(I)為0.2799。通過UPGMA聚類分析13個豬種(群)分成兩個大類群，中國地方豬種與