J亞群禽白血病病毒gp85重組干酪乳桿菌表達(dá)及其免疫效果的研究.pdf

1、J亞群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus subgroup J，ALV-J)是1988年首次在肉用型雞中分離得到，主要引發(fā)雞的髓細(xì)胞組織增生和腎瘤。該病已經(jīng)迅速蔓延到許多國(guó)家，給世界養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的損失。目前還沒有商品化的疫苗用于防治ALV-J感染，國(guó)外主要通過凈化種雞群的辦法來防控ALV-J。但是由于養(yǎng)殖的大環(huán)境已經(jīng)污染，所以只依靠?jī)艋瘉硗耆刂艫LV-J感染是不可能的。最近幾年，許多專家學(xué)者也都嘗試研制ALV-J

2、滅活苗和弱毒苗，但是由于滅活病毒的同時(shí)也破壞了其誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的能力，而且該病毒的抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，要想得到理想的弱毒苗十分困難。因此，研制新型有效的ALV-J疫苗勢(shì)在必行。
　　由于大多數(shù)病毒和細(xì)菌都是通過黏膜侵入動(dòng)物機(jī)體，所以利用活載體呈遞抗原到黏膜組織，從而誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答來抵抗大量的細(xì)菌病毒的入侵的這種途徑是十分有效的。近年來乳酸菌口服疫苗已成為研制的熱點(diǎn)，利用乳酸菌作為表達(dá)外源保護(hù)性抗原基因的活載體菌株，能將乳酸菌的生物學(xué)功能

3、和外源抗原基因的免疫原性相結(jié)合，同時(shí)乳酸菌作為正常生理性細(xì)菌，又符合新型疫苗的安全、方便、廉價(jià)等特點(diǎn)。
　　本研究的目的是探究原核表達(dá)J亞群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白誘導(dǎo)雛雞產(chǎn)生保護(hù)性抗體及抗ALV-J感染的作用。本研究利用PCR技術(shù)從J亞群禽白血病病毒env基因中擴(kuò)增出gp85囊膜糖蛋白基因;將其克隆至大腸-乳酸桿菌穿梭表達(dá)載體pMG36e中，轉(zhuǎn)入干酪乳酸桿菌，并使其表達(dá)。利用Western-blot、流式細(xì)胞技術(shù)和間接免疫熒

4、光檢測(cè)蛋白的表達(dá)含量和活性，并將含重組質(zhì)粒的干酪乳酸菌口服或滴鼻免疫SPF雞，免疫接種后檢測(cè)不同時(shí)間段抗體水平;同時(shí)在免疫7周后，對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行攻毒保護(hù)性試驗(yàn)。結(jié)果表明，重組干酪乳桿菌pMG36e-gp85/L.casei免疫雛雞后能夠產(chǎn)生明顯的抗體水平;對(duì)照組病毒血癥平均檢出率為86％，而口服組和滴鼻組病毒血癥平均檢出率為40％和55.2％;由此可見，構(gòu)建的重組干酪乳桿菌pMG36e-gp85/L.casei對(duì)禽白血病病毒具有一定的抵抗