J亞群禽白血病病毒嵌合多表位基因釀酒酵母表面展示.pdf

1、禽白血病(Avian Leukosis，AL)是指由反轉錄病毒科甲型反轉錄病毒屬禽反轉錄病毒引起的以禽類造血組織中某些細胞成分過度增生為主的各種具有傳染性的腫瘤性疾病，是世界性分布的禽腫瘤性傳染病，嚴重制約養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疫病之一。自1911年發(fā)現(xiàn)以來，ALV(Avian Leukosis Virus)成為研究腫瘤性傳染病發(fā)病機理的重要模型，針對它的研究一直受到各國科學家的重視。由于該病毒涵蓋多種亞群，同一亞群又有不同毒株，以及相關的內

2、源性病毒的廣泛存在，造成本病的防控難度大大增加。西方發(fā)達國家由于養(yǎng)殖模式和管理方式等方面的優(yōu)勢，通過幾十年的努力，對規(guī)?；B(yǎng)殖場ALV的感染基本實現(xiàn)了凈化。但是，近年來，ALV-J（J亞群禽白血病病毒）在我國的發(fā)生和蔓延卻呈現(xiàn)愈演愈烈的情形，不斷有我國白羽雞群和地方種雞發(fā)生ALV-J感染的報道，ALV-J感染的發(fā)病日齡也呈現(xiàn)提前的趨勢，并且首次發(fā)現(xiàn)了急性致瘤性ALV-J引發(fā)急性纖維肉瘤的自然感染的病例。ALV-J對我國禽業(yè)發(fā)展已造成嚴重

3、威脅，針對規(guī)?；u場進行ALV的凈化已成為我國養(yǎng)禽業(yè)當前的重要任務，但是，由于我國地緣遼闊、雞群品系繁多、養(yǎng)殖條件參差不齊等原因，實現(xiàn)ALV全面的凈化任重道遠。許多學者嘗試從分子生物學的角度研發(fā)ALV的疫苗降低ALV在雞群的感染率，以期加速ALV的凈化腳步。
　　多表位疫苗(Multi-epitope Vaccine)是利用分子生物學和計算機科學分析、篩選、獲取目標抗原中的優(yōu)秀抗原表位，將多個理想的抗原表位優(yōu)化并串聯(lián)研制出的一種新

4、型疫苗。這種疫苗尤其適用于基因容易突變或者基因組中存在癌基因的病毒，如人類免疫缺陷病毒(HIV)、禽白血病病毒(ALV)。通過分析并獲得這些病毒的抗原性和保守性都比較強的抗原表位研制多表位疫苗是攻克這些腫瘤疾病的重要方向。
　　釀酒酵母表面展示系統(tǒng)（Saccharomyces Cerevisiae Surface Display System）作為一種真核表達系統(tǒng)，越來越受到關注，在抗原抗體篩選、蛋白定向進化、水體凈化和活載體疫苗

5、等方面得到廣泛的應用。相比大腸桿菌、沙門氏菌等，釀酒酵母被公認為是安全無毒（GRAS，Generally Recognized as Safe）的食品級工業(yè)菌，廣泛用于食品發(fā)酵、制藥工程和畜禽飼料等領域，酵母的真核表達系統(tǒng)的翻譯后修飾比細菌更具優(yōu)勢。
　　本研究主要是利用酵母表面展示系統(tǒng)和多表位疫苗相關技術，通過已發(fā)表的關于ALV-J病毒結構的研究結果和生物信息軟件等篩選出ALV-J中保守性和抗原性較好的表位基因Gag(278-3

6、76aa)，Pol(784-855aa)，Env(Gp85:145-156aa和Gp37:412-538aa)片段串聯(lián)為多表位基因X，使用EBY100/pCTCON2酵母表面展示系統(tǒng)，構建了ALV-J嵌合多表位基因釀酒酵母表面展示載體EBY100/pCTCON2-X，并對嵌合多表位基因X在酵母細胞表面的表達情況進行了檢測。
　　結果表明，本研究成功構建了ALV-J嵌合多表位基因酵母表面展示載體，經(jīng)過誘導表達，在酵母細胞表面成功展示