J亞群禽白血病病毒gp85重組亞單位疫苗對(duì)雞群的免疫保護(hù)作用.pdf

1、J亞群禽白血病是由反轉(zhuǎn)錄病毒引起的高度傳染性疾病，該病最初發(fā)現(xiàn)于我國肉用雞群，近幾年大量報(bào)道顯示在我國蛋雞及地方品系雞群中也發(fā)現(xiàn)ALV-J的感染。為了保護(hù)我國優(yōu)良地方品系雞，控制和預(yù)防ALV-J在中國地方種雞中的流行，國家開始對(duì)我國地方種雞實(shí)施凈化的戰(zhàn)略決策。由于我國種雞品系和種群數(shù)量大、飼養(yǎng)不規(guī)范和飼養(yǎng)密集等特點(diǎn)，可能需要較長時(shí)間的凈化才能達(dá)到感染率非常低的防控要求。為加快這一凈化進(jìn)程，需要探索多種防治方法和措施來降低雞群的ALV-J

2、感染率。使用疫苗預(yù)防是一種有效的可選擇方法，但對(duì)ALV-J至今尚未有有效的疫苗在生產(chǎn)中加以應(yīng)用，能否研制有效的ALV-J疫苗需要科學(xué)探索。
　　 本研究根據(jù)已發(fā)表的ALV-J囊膜蛋白gp85基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物。從分離自我國肉雞樣品的ALV-J NX0101毒株eDNA中擴(kuò)增目的基因，并通過雙酶切及測序鑒定。該目的基因連接至pET32a(+)原核表達(dá)載體，并將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至E.coli，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后獲得大量穩(wěn)定表

3、達(dá)的重組目的蛋白。使用Ni柱純化方法對(duì)獲得的目的蛋白進(jìn)行純化，使用ALV-J單克隆抗體進(jìn)行Western-blot分析。把純化后的重組蛋白與不同佐劑(F佐劑和C佐劑)進(jìn)行乳化、混合，制備多種ALV-J重組亞單位疫苗。使用這些亞單位疫苗分別免疫7日齡雛雞和300日齡種雞，首次免疫后2-3周進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫，每周檢測血清中ALV-J抗體水平，二次免疫后分別對(duì)雛雞進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，種雞進(jìn)行人工受精并采集受精卵，對(duì)孵化雛雞1日齡進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。對(duì)攻毒

4、后的雛雞進(jìn)行病毒血癥檢測和免疫抑制等病變的觀察，評(píng)價(jià)重組蛋白亞單位疫苗對(duì)雛雞的免疫保護(hù)效果，同時(shí)對(duì)血清抗體進(jìn)行體外病毒中和試驗(yàn)。結(jié)果顯示:
　　 (1)通過PCR擴(kuò)增獲得大小為909bp的gp85目的基因，通過原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)，獲得大小為53KD并能與ALV-J單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合的重組蛋白。
　　 (2)使用重組亞單位疫苗分別與F佐劑和C佐劑聯(lián)合免疫7日齡雛雞后，全部雞只產(chǎn)生具有一定中和作用的血清

5、抗體，二次加強(qiáng)免疫能夠顯著提高抗體滴度和延長有效抗體維持時(shí)間，C佐劑和F佐劑分別與亞單位疫苗聯(lián)合免疫組降低病毒血癥的保護(hù)率分別為53.8％和66.7％，對(duì)ALV-J免疫致病性也有一定的降低作用。
　　 (3)使用F佐劑和C佐劑聯(lián)合重組亞單位疫苗能夠誘導(dǎo)母雞產(chǎn)生較高水平的血清抗體和卵黃抗體及雛雞血清抗體（母源抗體），這種母源抗體對(duì)雛雞早期抗ALV-J感染的保護(hù)率分別為60％和75％，并降低了ALV-J的致病性。
　　 以上