喹賽多作用相關(guān)基因表達(dá)的信號通路研究.pdf

1、喹賽多作為喹噁啉類藥物的新品種，具有良好的抗菌促生長作用，并且具有毒副作用小、安全性高、用藥后吸收快、消除迅速、殘留期短、無積蓄作用等優(yōu)點。實驗室運(yùn)用DDRT技術(shù)，從喹賽多作用下豬肝組織中篩選出7條差異表達(dá)的基因，分別是類胰島素樣生長因子-1(Insulin-like Growth Factor-1，IGF-1)、表皮生長因子(Epidermal Growth Factor，EGF)、ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose p

2、olymeras，PARP)、抗細(xì)胞凋亡因子1(The Defender Against Apoptotic Death1，DAD1)、補(bǔ)體C3(Complement Component3，C3)、轉(zhuǎn)酮醇酶(transketolase，TK)和新基因。其中DAD1在阻止細(xì)胞凋亡中起作用；而C3補(bǔ)體能通過免疫系統(tǒng)的激活來發(fā)揮抗菌抗炎作用，以增加機(jī)體免疫力；轉(zhuǎn)酮醇酶在磷酸戊糖途徑發(fā)揮著關(guān)鍵作用，調(diào)節(jié)葡萄糖代謝，并以此影響著細(xì)胞的增殖等生命活

3、動；EGF、IGF-1屬于生長因子類，對于生長具有重要的作用，PARP與DNA的損傷修復(fù)有關(guān)。因此喹賽多的抗菌促生長作用可能與這7個基因的表達(dá)密切相關(guān)。由于信號通路是調(diào)節(jié)基因表達(dá)的一種重要方式，喹賽多是通過哪些信號通路來調(diào)控這7個基因，在調(diào)控這7個基因的信號通路中，主要的信號通路與喹賽多的藥物作用有怎樣的聯(lián)系，是本論文所要解決的問題。
　　 1.PK-15細(xì)胞中喹賽多調(diào)控其作用相關(guān)基因表達(dá)的信號通路
　　 實驗運(yùn)用RT-

4、qPCR技術(shù)，采用相對定量方法，用喹賽多(2μM)作用于PK-15細(xì)胞分別作用0.5 h-8 h后對7個基因mRNA表達(dá)水平的時效關(guān)系進(jìn)行測定。結(jié)果表明在PK-15細(xì)胞系中，喹賽多(2μM)作用之后，DAD1、TK、PARP、EGF、C3、新基因6個基因的mRNA表達(dá)水平在1 h顯著升高，IGF-1 mRNA表達(dá)水平在喹賽多作用2h顯著升高。運(yùn)用RT-qPCR、Western Blot等技術(shù)，對PK-15細(xì)胞中喹賽多調(diào)控7個基因表達(dá)相關(guān)

5、信號通路進(jìn)行研究。結(jié)果表明，PI3K(phosphatidylinositol-3-kinase)、NF-κB(Nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer)信號通路對IGF-1的表達(dá)起主要作用，Erk1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2)、JNK(c-Jun N-terminalkinase)、Jak2(Janus k

6、inase)信號通路對IGF-1的表達(dá)可能起輔助作用；對于TK的表達(dá)，NF-κB信號通路對其表達(dá)起主要作用，Erk1/2、JAK2、PI3K、TGF-β(transforminggrowth factor)對其表達(dá)可能起輔助作用：PI3K、TGF-β、NF-κB信號通路對補(bǔ)體C3的表達(dá)起主要作用，Erk1/2起輔助作用；PI3K、NF-κB信號通路對PARP表達(dá)起主要作用，TGF-β、Erk1/2對PARP表達(dá)起輔助作用；對于DAD1的

7、表達(dá)，研究表明，PI3K信號通路對其表達(dá)起主要作用，NF-κB、JAK2、TGF-β對其表達(dá)可能起輔助作用；PI3K、NF-κB信號通路對EGF表達(dá)起主要作用，TGF-β信號通路對EGF表達(dá)起輔助作用；PI3K、Erk1/2、NF-κB信號通路對新基因的表達(dá)起主要作用?？傮w來說，在PK-15細(xì)胞系中，喹賽多主要通過P13K和NF-κB信號通路來調(diào)控其作用相關(guān)7個基因的表達(dá)。
　　 2.豬原代肝細(xì)胞中喹賽多調(diào)控其作用相關(guān)基因表達(dá)的

8、信號通路
　　 實驗運(yùn)用RT-qPCR技術(shù)等技術(shù)，對喹賽多孵育豬原代肝細(xì)胞7個基因mRNA表達(dá)水平的時效關(guān)系進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)在豬原代肝細(xì)胞中，喹賽多孵育細(xì)胞0.5 h后，新基因、DAD1 mRNA表達(dá)水平顯著升高，EGF mRNA表達(dá)水平升高且差異極顯著；在1h時，IGF-1、TK、PARP mRNA表達(dá)水平升高且差異極顯著；2h時，C3RNA表達(dá)水平升高且差異極顯著。運(yùn)用RT-qPCR技術(shù)，對豬原代肝細(xì)胞喹賽多調(diào)控7個基因表達(dá)相

9、關(guān)信號通路進(jìn)行研究。結(jié)果表明，在豬原代肝細(xì)胞中，PI3K是調(diào)節(jié)EGF的主要信號通路。JNK、PI3K是調(diào)節(jié)IGF-1的主要信號通路。喹賽多主要通過TGF-β信號通路來調(diào)節(jié)C3表達(dá)。喹賽多主要通過TGF-β、PI3K信號通路來調(diào)節(jié)DAD1表達(dá)。喹賽多主要通過TGF-β、P38、PI3K等信號通路來調(diào)節(jié)PARP表達(dá)。喹賽多主要通過ERK1/2、P38、TGF-β、JNK、PI3K等信號通路調(diào)節(jié)TK表達(dá)。對于新基因而言，其表達(dá)受多條信號通路的

10、調(diào)節(jié)，其中最主要的是P38、TGF-β、JNK和PI3K信號通路。
　　 綜上所述，本研究首次對PK-15細(xì)胞系和豬原代肝細(xì)胞中喹賽多作用相關(guān)7個基因的時效關(guān)系進(jìn)行測定，首次對PK-15細(xì)胞系和豬原代肝細(xì)胞中喹賽多對其作用相關(guān)7個基因的信號通路調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究。研究表明，喹賽多在PK-15和豬原代肝細(xì)胞中的作用方式有相同，也有不同。相同點是在兩個細(xì)胞中，喹賽多調(diào)節(jié)其作用相關(guān)7個基因的主要信號通路是相同的，都有PI3K這條與生長密