秸稈反應(yīng)堆中淡紫擬青霉與根結(jié)線蟲、尖孢鐮刀菌互作的研究.pdf

1、黃瓜是設(shè)施蔬菜中受到連作影響最重的蔬菜，連作導(dǎo)致了黃瓜根結(jié)線蟲、枯萎病等病害的加重。淡紫擬青霉是重要的生防菌，可有效防治黃瓜根結(jié)線蟲，抑制導(dǎo)致黃瓜枯萎病的尖孢鐮刀菌。秸稈反應(yīng)堆技術(shù)應(yīng)用在溫室作物的種植中，可以改善土壤中微生態(tài)環(huán)境，使其朝著有利于作物生長(zhǎng)的方向發(fā)展。但目前對(duì)秸稈反應(yīng)堆中生防菌種群變化以及與病原物之間的互作關(guān)系還缺乏深入研究。
　　 本研究明確了秸稈反應(yīng)堆技術(shù)對(duì)生防菌(淡紫擬青霉)與病原物(根結(jié)線蟲和尖孢鐮刀菌)之間

2、互作關(guān)系的影響，為生防菌的生態(tài)調(diào)控機(jī)理研究和生防效果的評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。
　　 本研究的主要結(jié)果如下：
　　 1、通過RAPD技術(shù)設(shè)計(jì)了淡紫擬青霉特異性引物。采用隨機(jī)引物對(duì)YES-2-14以及近緣菌株的基因組DNA多態(tài)性進(jìn)行分析，擴(kuò)增到僅出現(xiàn)于淡紫擬青霉基因圖譜中的特異性條帶(大小為203bp)。根據(jù)YES-2-14的RAPD標(biāo)記中核苷酸序列設(shè)計(jì)引物并用于菌株特異性條帶的篩選，從中挑選出1對(duì)特異性最好的引物轉(zhuǎn)化為SCAR

3、引物，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為195bp。通過PCR進(jìn)一步驗(yàn)證SCAR引物的特異性，結(jié)果僅有淡紫擬青霉菌株可擴(kuò)增到相應(yīng)的SCAR條帶，表明該引物可用于土壤中淡紫擬青霉的快速鑒別。
　　 2、建立了淡紫擬青霉熒光定量檢測(cè)體系。利用淡紫擬青霉YES-2-14菌株的RAPD克隆質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)為0.995。經(jīng)過土壤樣品試驗(yàn)，得出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.9977，表明所建立的淡紫擬青霉熒光定量檢測(cè)體系可用于土壤中淡紫擬青霉

4、的準(zhǔn)確定量。
　　 3、建立了尖孢鐮刀菌熒光定量檢測(cè)體系。利用尖孢鐮刀菌T7-1-3的陽(yáng)性克隆質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)為0.995。經(jīng)過土壤樣品試驗(yàn)，得出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.9873。
　　 4、建立了秸稈反應(yīng)堆，研究了秸稈反應(yīng)堆對(duì)淡紫擬青霉與根結(jié)線蟲、尖孢鐮刀菌互作關(guān)系的影響。復(fù)合病圃和線蟲病圃中，秸稈反應(yīng)堆處理的根圍土中淡紫擬青霉菌量與只加生防菌的處理中淡紫擬青霉菌量有顯著性差異(p=0.05)