江蘇地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定和嵌合型PCV1-2 206佐劑滅活苗對商品豬的免疫保護研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type2，PCV2)是引起豬圓環(huán)病毒病(porcinecircovirus associated diseases，PCVAD)的主要病原，是繼豬繁殖與呼吸綜合征(porcinereproductive and respiratory syndrome，PRRS)之后發(fā)現(xiàn)的又一重要疫病。自1997年Clark等首次分離到PCV2以來，該病已給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。在200

2、8年第20屆國際豬病大會(The20th International Pig Veterinary Society Congress，20th IPVS)上，曾將其列為危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的頭號疫病。我國自2000年郎洪武首次報道豬群中存在PCV2抗體以來，各地陸續(xù)報道，表明感染范圍已波及全國。
　　本文旨在檢測江蘇部分豬場PCV2的流行情況，為PCV2相關疾病的防制提供參考。同時，用本實驗室構建的嵌合型豬圓環(huán)病毒1-2型DNA克隆電轉

3、染Dulac細胞，獲得嵌合型PCV1-2病毒。將該病毒滅活后以206佐劑乳化制備滅活苗免疫無PCV2母源抗體的商品豬，并對免疫豬攻擊PCV2。通過對免疫攻毒豬的相關指標進行觀察、分析，以評價該滅活疫苗對于預防PCV2感染的有效性。
　　1豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定
　　在揚州某規(guī)?；涝讏觯ㄍ涝棕i來自江蘇部分地區(qū)）進行采樣，通過PCR方法檢測樣品中PCV2的DNA。陽性樣品作PCV2的分離，對分離到的5株PCV2進行全序列測定

4、。
　　對全基因組進行測序后發(fā)現(xiàn)，分離到的5個PCV2分離株的基因組全長均為1767bp，ORF2序列全長為705 bp。5個分離株之間的DNA序列同源性高，為99.6～99.7％。系統(tǒng)發(fā)生樹顯示5個分離株均屬PCV2 group1亞型，即PCV2b。其親緣關系近，屬進化樹的同一個微小分支。廣東分離株group1C和荷蘭分離株group1C與它們的同源性最為接近，同屬于一個大的分支。流行病學調查表明，PCV2 group1即PCV

5、2b已成為目前江蘇地區(qū)流行的優(yōu)勢毒株。為研究本地區(qū)PCV2的遺傳和變異，探索PCV2的遺傳進化關系等提供了材料。
　　2嵌合型PCV1-2病毒滅活苗對商品豬感染PCV2免疫保護效力的研究
　　本文運用多功能細胞電穿孔儀將本實驗室構建的嵌合型豬圓環(huán)病毒1-2型DNA克隆轉染Dulac細胞，傳代培養(yǎng)后收獲嵌合型豬圓環(huán)病毒PCV1-2。將該重組病毒滅活后與206佐劑乳化制成滅活苗，免疫42日齡的PCV2母源抗體陰性商品豬，一免后2

6、1天加強免疫一次，第二次免疫后14天攻擊PCV2毒株。
　　結果表明，二免后14天，所有免疫組試驗豬都表現(xiàn)為血清學陽性，可檢測到高滴度的PCV2特異熒光抗體，且中和抗體效價水平在1/15～1/20。攻毒后21天撲殺試驗豬并剖檢，免疫組豬的淋巴結和各臟器的大體和顯微病變都比攻毒對照組輕微。攻毒對照組豬的淋巴結出現(xiàn)多核巨細胞和嗜酸性粒細胞，且有大量的淋巴細胞缺失，免疫組未見多核巨細胞，淋巴細胞缺失也少見。熒光定量PCR測得腹股溝淋巴結