植物病原真菌及重寄生菌的分離鑒定與侵染性研究.pdf

1、由白粉菌(Erysiphauceae)導(dǎo)致的白粉病和核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)導(dǎo)致的菌核病是兩種危害農(nóng)作物較為嚴(yán)重的真菌病害。
　　白粉菌危害嚴(yán)重，且防治困難。白粉寄生孢(Ampelomyces quisqualis)作為白粉菌上較為重要的重寄生菌，能夠在大多數(shù)白粉菌上寄生，并對用來防治白粉菌的化學(xué)藥物具有抗藥性，因此白粉寄生孢具有防治植物白粉病的作用。但由于來源不同的白粉寄生孢菌株間存在一定的遺傳

2、差異，所以在利用白粉寄生孢防治白粉病時具有一定局限性，所以明確白粉寄生孢的資源狀況，篩選新的有潛力的生防菌株就顯得及其重要。
　　由核盤菌侵染引起的菌核病是一種嚴(yán)重病害，核盤菌是一種放線狀子囊真菌，其寄主范圍和地理分布十分廣泛，尤其在南方油菜產(chǎn)區(qū)發(fā)病嚴(yán)重，該病害在發(fā)病嚴(yán)重年份病株率可達(dá)50-80％，嚴(yán)重制約油菜品質(zhì)和產(chǎn)量，造成經(jīng)濟(jì)上的損失，是危害油菜最嚴(yán)重的病害之一。
　　本文對周口地區(qū)番茄白粉菌和分離自鳳仙花白粉病上的白粉

3、寄生孢以及感染了菌核病油菜上的核盤菌進(jìn)行了顯微觀察、生物學(xué)特性、分子生物學(xué)以及致病性等研究，并取得了以下主要結(jié)果：
　　1.對周口地區(qū)檢出的番茄白粉菌進(jìn)行了顯微形態(tài)分析、核糖體DNA轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS(inter transcribed spacer)進(jìn)行PCR擴(kuò)增及進(jìn)化分析。結(jié)果表明：在掃描電子顯微鏡下病菌分生孢子呈圓柱形或橢圓形，無支鏈，ITS序列與來自日本番茄上的0.neolycopersici(AB094991)和來自美國番

4、茄上的0.neolycopersici(AB163915)同源性最高聚為一支，序列同源性達(dá)到100％，分析結(jié)果表明，來自周口地區(qū)的番茄白粉菌為Oidiumneo lyvcopersici。
　　2.從河南省周口市采集感染白粉病的鳳仙花植株，采用單孢分離法分離得到白粉寄生孢，對該菌進(jìn)行菌落和顯微形態(tài)分析，初步證明該菌株為A.quisqualis。利用真菌通用引物ITS1和ITS4對所分離的菌株內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到578

5、bp大小的片段，經(jīng)過克隆測序和在GenBank中進(jìn)行BLASTn分析，發(fā)現(xiàn)與德國和美國白粉寄生孢ITS序列的同源性達(dá)到100％，進(jìn)一步證明該分離菌株為A.quisqualis。并將白粉寄生孢接種在患有白粉病的大葉黃楊葉面上，經(jīng)一周時間檢查發(fā)現(xiàn)，白粉菌菌體由無色漸變成淺黃色或淺褐色，并漸漸萎縮至白粉層消失，說明從周口地區(qū)鳳仙花白粉病病株上分離得到的白粉寄生孢具有防治白粉病的效果。
　　3.通過探究白粉寄生孢最適的生長環(huán)境研究發(fā)現(xiàn)，其

6、溫度生長范圍較廣：10-30℃，菌株生長和產(chǎn)孢的最適溫度為20℃。白粉寄生孢在pH5-10時均可生長及產(chǎn)孢，其中pH值為7時最適宜其產(chǎn)孢。最適合生長的理想C源為葡萄糖，最適合的N源為蛋白胨，持續(xù)光照對菌株的生長及產(chǎn)孢具有明顯的促進(jìn)作用。
　　4.從河南省周口市采集感染菌核病的油菜，對核盤菌進(jìn)行分離和鑒定。采用單孢分離法分離得到該菌系，對該菌系進(jìn)行了菌落和顯微形態(tài)分析，初步證明該菌株為S.sclerotiorum。利用真菌通用引物I

7、TS1和ITS4對所分離的單菌系ITS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到640bp大小的片段，經(jīng)過克隆測序和在GenBank中進(jìn)行BLASTn分析，發(fā)現(xiàn)與已知核盤菌屬菌核病菌ITS序列的同源性達(dá)到100％，進(jìn)一步證明該分離菌株為S.sclerotiorum。
　　5.通過研究不同溫度、pH值、C源和N源、光照、培養(yǎng)基對核盤菌的最適合生長環(huán)境的研究表明，核盤菌溫度生長范圍較廣：15-35℃，其中25℃是菌株生長及產(chǎn)孢的最適溫度，核盤菌在pH5