熒光假單胞菌Pseudomonas fluorescens P-72-10菌株對(duì)煙草黑脛病的生防機(jī)理研究.pdf

1、西南大學(xué)博士學(xué)位論文熒光假單胞菌PseudomonasfluescensP7210菌株對(duì)煙草黑脛病的生防機(jī)理研究姓名：董國(guó)菊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：周常勇20120605西南大學(xué)博士學(xué)位論文菌化，該突變菌株能成功地定殖于煙草幼苗的根部，其在根部的定殖動(dòng)態(tài)呈現(xiàn)為先上升后下降的趨勢(shì)；種子萌發(fā)出苗28天后，在煙草幼苗的根部仍能檢測(cè)到P7210：Rif菌株，其定殖量維持在104cfl噸這一穩(wěn)定的水平。掃描電鏡定性觀察發(fā)現(xiàn)P7

2、210：Rif菌株在煙草幼苗根表不同部位的定殖分布呈現(xiàn)宏觀不均勻性，根基部分布的菌體數(shù)量多于根中部，而根尖部分的細(xì)菌菌體數(shù)量最少。P一72—10菌株對(duì)煙草的促生效果及作用機(jī)制煙草種子經(jīng)P7210菌株不同濃度的培養(yǎng)液浸種處理后，能促進(jìn)幼根的伸長(zhǎng)，其中，以101濃度促生效果最好，根長(zhǎng)為053cm，而對(duì)照根長(zhǎng)為O47cm，與對(duì)照相比，增加了1276％，且差異顯著妒005)；且種子的可溶性蛋白含量增加，總淀粉酶活性升高。培養(yǎng)液灌根處理煙草幼苗后

3、，也能促進(jìn)幼苗的生長(zhǎng)及對(duì)N、P、K的吸收；增強(qiáng)光合效率、提高葉綠素含量；幼苗中丙二醛的積累量降低，與煙草植株抗性相關(guān)的防御酶(PPO、POD、PAL、幾丁質(zhì)酶和p1，3葡聚糖酶)活性升高，而各種防御酶活性的變化趨勢(shì)不一致，其活性高峰出現(xiàn)時(shí)間與數(shù)量也有差異。P72lO菌株的鑒定該菌株在King’sB培養(yǎng)基上菌落呈乳白色，且能產(chǎn)生水溶性的黃綠色熒光色素：為革蘭氏陰性細(xì)菌，菌體桿狀、大小(81162)(18—48)pm，單端生鞭毛，不形成芽孢

4、。其最適生長(zhǎng)溫度為30℃；不耐鹽；能利用檸檬酸鹽和丙酸鹽。接觸酶反應(yīng)陽性，氧化酶反應(yīng)陽性，精氨酸雙水解酶反應(yīng)陽性，苯丙氨酸脫羧酶反應(yīng)陰性，脂酶反應(yīng)陰性，硝酸鹽還原反應(yīng)陰性：水解明膠和酪氨酸，但不水解淀粉；_能發(fā)酵葡萄糖、木糖和甘露醇。該菌株基因組DNA的(GC)m01％含量為6072mol％，16SrDNA基因序列分析顯示該菌株與假單胞菌屬的熒光假單胞菌多個(gè)菌株的序列同源性達(dá)到99％，在Gel1Ballk上的登陸號(hào)為：HQ888871。

5、因此，該菌株鑒定為熒光假單胞菌nPz比如肌冊(cè)甜艦Dr甜cP，2s。P7210菌株搖瓶培養(yǎng)條件的優(yōu)化搖瓶培養(yǎng)條件下，當(dāng)pH為70、培養(yǎng)時(shí)間達(dá)52h、培養(yǎng)溫度為25℃時(shí)，P7210菌株在標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵培養(yǎng)基中能獲得最大量的抗菌物質(zhì)，且其抑菌活性最高；該菌株的抗茵物質(zhì)不能長(zhǎng)時(shí)間地耐受高溫處理。正交試驗(yàn)表明該菌株在搖瓶培養(yǎng)條件下獲得抗菌物質(zhì)的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組分配比為：葡萄糖23g，硫酸銨20g，硝酸鉀55g，氯化鈉O5g，蒸餾水looOmL，pH為7