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文檔簡介
1、櫛江珧(Atrina pectinata)在我國沿海分布較廣,經濟價值很高。目前關于櫛江珧的研究較少,主要集中在形態(tài)學和繁殖生物學,群體遺傳學和分子生物學研究相對較少。本研究以野生櫛江珧為材料,首先探討了櫛江珧形態(tài)性狀對重量性狀的影響效果,為櫛江珧質量性狀的選育提供了一定的理論參考;其次進行了微衛(wèi)星多態(tài)性引物的篩選及在我國野生櫛江珧群體的遺傳多樣性分析,豐富了櫛江珧群體遺傳學和分子生物學的研究內容。取得的主要結果如下:
1.櫛
2、江珧形態(tài)性狀對重量性狀的影響:隨機選取101只山東日照的野生櫛江珧,測量其殼長(SL)、殼寬(SW)、殼高(SH)、殼頂角(AG)4個形態(tài)性狀和體重(WG)、軟體重(WT)、閉殼肌重(WM)3個重量性狀,采用相關分析和通徑分析得出了不同形態(tài)性狀對重量性狀的影響效果。結果表明,除殼頂角與閉殼肌重的相關系數(shù)不顯著外,其余形態(tài)性狀與重量性狀間的相關系數(shù)均達極顯著水平(P<0.01);殼高對重量性狀的直接作用和間接作用均較大,是影響重量性狀的主
3、要因素;殼長和殼寬通過殼長對重量性狀的間接作用較大,直接作用較小,是影響重量性狀的兩個次要因素;利用逐步回歸分析建立了櫛江珧形態(tài)性狀關于體重(Y=69.112SH+52.823SW-751.367)、閉殼肌重(Y=4.275SH-18.610)和軟體重(Y=37.161SH+43.404SW+4.111SA-614.096)的最優(yōu)回歸方程。實驗結果為櫛江珧的選擇育種研究提供了一定的理論參考。
2.櫛江珧微衛(wèi)星富集文庫的構建與多
4、態(tài)性引物的篩選:首先用限制性內切酶Msp I對基因組 DNA進行酶切,并將酶切產物與 Msp I接頭(HMA1:5'-GATCATGAGTCCTGCT-3',HMA2:5'-CGAGCAGGACTCAGAA-3')進行連接,連接產物與生物素標記的寡核苷酸探針(AC)15進行雜交,并將雜交產物與包被有鏈霉親和素的磁珠相結合,對雜交產物-探針-磁珠的雜交復合物進行洗脫,洗脫得到的微衛(wèi)星序列進行 PCR擴增后克隆進 pMD18-T載體中,然后
5、轉入到感受態(tài)細胞中,挑選陽性克隆進行測序。對192個菌落中的109個陽性克隆進行微衛(wèi)星測序,其中93個序列測序成功,使用SSR Hunter軟件處理序列得到66個重復5次以上的微衛(wèi)星序列,其中完美型51個,占77.3%;不完美型11個,占16.7%;混合型4個,占6.1%。根據測序結果共設計微衛(wèi)星引物32對,經退火溫度和多態(tài)性篩選,有26對能擴增出特異性目的片段,21對在群體擴增中具有多態(tài)性。
3.我國5個地理群體櫛江珧的遺傳
6、多樣性分析:從篩選出的21對多態(tài)性較強的引物中,選擇產物較好的8對,以5個櫛江珧野生群體(中國北方:山東蓬萊、文登和日照;中國南方:廣東湛江和海南三亞)共150個櫛江珧樣本為研究對象,進行了遺傳多樣性分析。8對微衛(wèi)星引物在5個地理群體中共檢測到41個等位基因,平均每對引物檢測到5.13個,有效等位基因分別為1.6590~6.1205個,平均3.0339個。5個櫛江珧地理群體的期望雜合度分別為0.4863、0.5704、0.5512、0.
7、5703、0.5806,雜合度較高;平均多態(tài)信息含量(PIC)為0.4162、0.4869、0.4805、0.4881、0.5017,均達到高度多態(tài),雜合度和PIC說明5個群體的櫛江珧遺傳多樣性較高。兩兩群體間遺傳分化指數(shù)(Fst)為0.0292~0.2805,遺傳距離為0.0853~0.5458,北方三個群體之間遺傳分化較弱,遺傳距離較近,可認為是一個物種的不同地理群體;南方兩個群體的遺傳距離與Fst也表明其為同一個物種的兩個地理群體
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