游離棉酚的定量、定性研究及其對羅非魚生長的影響.pdf

1、試驗一:優(yōu)化HPLC法測定棉粕中游離棉酚含量的研究
　　本實驗建立了一種高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography,HPLC)測定棉粕中游離棉酚含量的優(yōu)化方法。用丙酮提取棉粕樣品,經(jīng)超聲、離心、抽濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理,用乙腈/0.2％磷酸(85/15，v/v)溶劑溶解;色譜條件為:色譜柱Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流動相為乙腈:0.2%磷酸=85

2、:15,流速1.0 mL/min,紫外檢測波長235 nm,進(jìn)樣量20μL,柱溫25℃。游離棉酚的回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=189347x+24969(r=0.99999),在游離棉酚濃度為0.1224~78.336μg/mL范圍內(nèi)線性良好,最低定量限為0.52 mg/kg;棉粕樣品36小時內(nèi)4℃穩(wěn)定性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.51%~3.43%;平均回收率為94.72%~99.49%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.72%~3.13%。本方法穩(wěn)定性好,準(zhǔn)確度、靈

3、敏度和回收率高。
　　試驗二:高效液相色譜-離子阱-飛行時間質(zhì)譜定性分析棉粕中游離棉酚及其衍生物
　　分別以分光光度法和高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatograph HPLC)檢測棉粕中游離棉酚的含量為700.05、60.04 mg/kg,為解釋兩種方法測定值間存在顯著差異的原因,本研究采用高效液相色譜-離子阱-飛行時間質(zhì)譜法(LCMS-IT-TOF)對棉粕中游離棉酚及其衍生物進(jìn)

4、行了定性分析。采用Shimadzu Shim-pack XR-ODS(2.0 mm×75 mm,2.2μm)色譜柱,以0.1%甲酸水溶液—乙腈為流動相進(jìn)行梯度洗脫分離,并與電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用,采用負(fù)離子模式,對樣品進(jìn)行掃描,選擇分子量與游離棉酚相近的物質(zhì)進(jìn)行多級質(zhì)譜,推測游離棉酚的多級質(zhì)譜裂解規(guī)律;根據(jù)有機(jī)化合物裂解規(guī)律、碎片信息(MSn)、同位素規(guī)則、不飽和度及氮規(guī)則,結(jié)合Shimadzu Formula Predictor分子式預(yù)

5、測軟件,推測游離棉酚衍生物的分子結(jié)構(gòu)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),棉粕中含有12種棉酚衍生物,并對其中的7種棉酚衍生物分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析;這些棉酚衍生物主要是棉酚通過脫去一分子水和異丙基的甲基,或是甲基取代了羥基上的氫,或是含氮化合物取代醛基上的氧形成C=N結(jié)構(gòu),或是醛基取代異丙基上的甲基等而形成。可見,分光光度計法測定棉粕中游離棉酚含量實際上包括了游離棉酚及其12種棉酚衍生物,這些衍生物可能具有與棉酚類似的生物學(xué)效應(yīng)。
　　試驗三:醋酸棉酚對奧尼

6、羅非魚生長和血清生化指標(biāo)的影響
　　本實驗研究了飼料中添加醋酸棉酚對奧尼羅非魚生長性能和血清生化指標(biāo)的影響。在基礎(chǔ)飼料(對照組)中分別添加0、300、600、900、1200 m g/kg醋酸棉酚,飼養(yǎng)均重1.27±0.06 g的羅非魚8周。結(jié)果表明,隨著棉酚添加量的增加,羅非魚增重率逐漸降低,飼料系數(shù)逐漸升高,600、900、1200 mg/kg組羅非魚增重率分別比對照組降低13.08%、20.13%、29.76%,飼料系數(shù)升高

7、8.16%、14.96%、26.51%,其中,900、1200 mg/kg組的魚體增重率均顯著低于對照組(P<0.05),1200 mg/kg組魚的飼料系數(shù)顯著高于對照組(P<0.05);1200mg/kg組羅非魚血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)顯著高于對照組(P<0.05);醋酸棉酚對羅非魚血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素(UREA)含量沒有顯著影響(P>0.05)。綜上所述,當(dāng)飼料中添加醋酸棉酚達(dá)900 mg/kg時,羅非魚的生長