犢牛直腸菌群多樣性的研究.pdf

1、犢牛腹瀉的高發(fā)病率和高死亡率給整個規(guī)模化養(yǎng)牛產業(yè)帶來了巨大的經濟損失，有報道稱，超過50％的初生犢牛的死亡都是由腹瀉引起的。目前，國內關于犢牛腹瀉的研究多集中于某個血清型病原菌的流行病學的調查研究或是針對病例爆發(fā)的病原菌的分離鑒定以及治療方面的研究，而對腹瀉發(fā)生時腸道微生物的多樣性及其變化的研究報道很少。瘤胃是反芻動物營養(yǎng)代謝中最重要的環(huán)節(jié)，也是研究微生物多樣性的熱點。然而犢牛瘤胃尚未發(fā)育完全，故其腸道微生物菌群在宿主健康和營養(yǎng)中的作用

2、相當重要和顯著。開展關于犢牛腸道微生物多樣性研究，不僅可以比較全面地了解腸道微生物菌群，促進腸道微生物資源的開發(fā)和利用，而且還能為初生犢牛動物營養(yǎng)研究以及犢牛腹瀉的發(fā)生提供實驗依據(jù)，為更好的預防和控制犢牛腹瀉有著重要的意義。
　　隨著分子生物學技術的發(fā)展，從分子水平研究環(huán)境微生物的群落結構已經成為可能。PCR(聚合酶鏈式反應)、RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)技術的建立和16SrRNA測序技術的不斷完善以及將這些技術融合而產生一種

3、簡單、快速和有效的微生物多樣性或者群落結構分析方法。與傳統(tǒng)方法相比，它不需要分離培養(yǎng)細菌，可利用PCR擴增環(huán)境樣品中所有細菌的16SrRNA，包括活菌(可培養(yǎng)和不可培養(yǎng))和未降解的死菌。本論文利用16SrRNA-RFLP(16SrRNArestrictionfragmentlengthpolymorphism)的分子生物學方法直接對規(guī)?；B(yǎng)殖的2周齡內健康和腹瀉犢牛直腸中的細菌進行分類，同時分析腹瀉前后直腸中細菌的種群變化情況，探索細菌

4、種群變化情況與犢牛腹瀉之間的關系。
　　研究結果表明：
　　1．從4頭1-2周齡健康犢牛的16SrDNA克隆文庫中隨機挑選了506個克隆，通過菌落PCR技術篩選出488個陽性克隆，其中共143個OTUs。在測序得到的14個克隆的16SrRNA序列中，1條為嵌合序列。經過系統(tǒng)學分析，13條非嵌合序列分屬于以下幾大細菌類群：梭菌屬(13%)、雙歧桿菌屬(8%)、擬桿菌屬(3%)、真桿菌屬(3%)、普氏菌屬(2%)、埃希菌屬(4%

5、)、巨型球菌屬(5%)和不可培養(yǎng)菌(8%)等，以專性厭氧菌屬為主。
　　2．從4頭2周齡腹瀉犢牛的16SrDNA克隆文庫中隨機挑選了480個克隆，通過菌落PCR技術篩選出474個陽性克隆，其中共91個OTUs。在測序得到的12個克隆的16SrRNA序列中，無嵌合序列。經過系統(tǒng)學分析，12條非嵌合序列分屬于以下幾大細菌類群：乳桿菌屬(14%)、腸球菌屬(10%)、埃希菌屬(8%)、弧菌(5%)和不可培養(yǎng)菌(20%)等，以需氧兼性厭氧