裙帶菜配子體培養(yǎng)條件的優(yōu)化及孢子體的SSR分析.pdf

1、裙帶菜是我國重要的經(jīng)濟海藻,其營養(yǎng)價值高,市場需求量也逐年增加,而影響裙帶菜栽培產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關鍵問題之一是種苗品質(zhì)問題。培育新品種是改善裙帶菜栽培品質(zhì)的有效手段。相對于傳統(tǒng)方法,單倍體克隆雜交是育苗育種的高效方法。本文以品種培育為出發(fā)點,展開以下三部分實驗,以期對裙帶菜雜交育種工作提供基礎數(shù)據(jù)。
　　1.日本三陸裙帶菜配子體克隆擴培條件的優(yōu)化
　　實驗分兩步進行。首先對影響裙帶菜配子體克隆生長的溫度、光照強度進行優(yōu)化。溫度和光

2、強各設置四個梯度,分別為18℃、21℃、24℃、27℃:25001x、40001x、55001x、70001x,實驗采用完全交叉分組設計,共16個處理。結果顯示,光強和溫度等環(huán)境因素對配子體生長有較大影響,并且兩因素存在交互作用,對配子體生長影響也很大,但各單一因素的影響又表現(xiàn)出一定的差異性。21℃、25001x的條件組合是實驗中配子體培養(yǎng)的最佳條件。在培養(yǎng)的第5天到第10天之間,裙帶菜配子體克隆的細胞增長率最大,所以可在第10天對配子

3、體進行繼代培養(yǎng),使其保持較高的增長率。
　　在第一步實驗的基礎上,進一步優(yōu)化影響配子體擴培的初始接種密度、培養(yǎng)方式等條件,最終確定日本三陸裙帶菜配子體克隆擴培的最適溫度、光強、培養(yǎng)方式和接種密度等條件。本實驗設置靜置、磁力攪拌和充氣懸浮三種培養(yǎng)方式,接種密度設置6個梯度,分別為0.1 g/L、0.2g/L、0.4g/L、0.6 g/L、0.8g/L、1.0g/L,實驗采用完全交叉分組設計,共18個處理。結果顯示,培養(yǎng)方式和初始接種

4、密度等條件對配子體生長有較大影響,并且兩者存在交互作用,但各單一因素的影響又表現(xiàn)出一定的差異性,初始接種密度為0.1～0.2g/L的充氣培養(yǎng)條件是配子體培養(yǎng)的最佳條件組合。所以本實驗中,日本三陸裙帶菜雌配子體克隆擴培的最適培養(yǎng)條件為:溫度21℃、光強25001x、接種密度0.1～0.2g/L的充氣懸浮培養(yǎng)。
　　2.海帶微衛(wèi)星引物對裙帶菜群體分析適用性的研究
　　為獲得用于裙帶菜種質(zhì)結構和遺傳多樣性分析的微衛(wèi)星標記,本實驗采

5、用近緣物種轉移法分析了15個海帶微衛(wèi)星引物在裙帶菜中的應用情況。對38個裙帶菜個體進行多樣性分析,結果顯示:標記SSR002和SSR115不能擴增裙帶菜基因組,位點SSR194能擴增,但不具有多態(tài)性,其他12個標記均能擴增裙帶菜DNA,且都具有檢出多態(tài)性,其中9個符合哈迪-溫伯格平衡。這9個海帶微衛(wèi)星標記檢出的等位基因數(shù)為34個,從3到5個不等,平均每個位點擴增得到3.8個等位基因。觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)及多態(tài)性信息含量

6、值(PIC)的范圍分別為0.238～1.000、0.500～0.692、0.413～0.780,9個位點提供的多態(tài)性較高,適用于裙帶菜遺傳學研究。
　　3.裙帶菜群體的遺傳多樣性研究
　　通過SSR分子標記初步評估裙帶菜主產(chǎn)區(qū)栽培群體和野生群體的遺傳多樣性,為裙帶菜將來的品種培育提供參考。29對SSR引物擴增出105個等位位點。四個群體的有效等位基因數(shù)(Ne)為1.7438～2.0857,多樣性指數(shù)(H)為0.3810～0.

7、4541,香農(nóng)指數(shù)(I)為0.6211～0.7408,多態(tài)性位點比率為93.10％～100.00％。其中多態(tài)性最高的是青島野生種群,P,H I值分別是100.00％,0.4541,0.7408,多態(tài)性最低的是韓國栽培群體,P,H,I值分別是93.10％,0.3810,0.6211。以群體間的遺傳距離為基礎,用非加權類平均法(UPGMA)分別構建群體間的系統(tǒng)樹圖。AMOVA分析顯示,大部分的遺傳變異(79.72％)存在于存在于群體內(nèi),少部