卡介菌多糖核酸體外抗病毒活性試驗研究.pdf

1、卡介菌多糖核酸(Polysaccharide nucleic acid fraction of Bacillus CalmetteGuerin，BCG-PSN)是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的生物活性物質(zhì)。研究表明，BCG-PSN具有多種生物學(xué)功能，可提高細(xì)胞和體液免疫，刺激T細(xì)胞增殖以及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的各種功能等。目前，BCG-PSN的應(yīng)用報道多集中在人類醫(yī)學(xué)上，主要用于預(yù)防和治療哮喘、慢性支氣管炎、結(jié)核、過敏性鼻炎、皮膚過敏性疾病、白癲風(fēng)、腫

2、瘤等多種疾病。然而，BCG-PSN在獸醫(yī)臨床中的應(yīng)用鮮有報道，更缺乏深入研究。另外，卡介菌多糖核酸是由多糖組份與核酸組份共同構(gòu)成，其兩種組份的確切成份、具體功能以及哪種組份起主要作用均不明確。本文在原有工藝基礎(chǔ)上改進(jìn)了細(xì)菌破壁的方法，采用低溫超聲波破壁技術(shù)及熱酚法提取BCG-PSN，并利用DEAE-纖維素陰離子柱交換層析分離多糖和核酸，為深入研究其結(jié)構(gòu)與功能奠定基礎(chǔ)。同時，本文通過BCG-PSN對感染水皰口炎病毒(VSV)雞胚成纖維細(xì)胞

3、的病毒抑制試驗，初步探討B(tài)CG-PSN對VSV的體外抗病毒效果及機(jī)制，為以后的深入研究及其獸醫(yī)臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)驗基礎(chǔ)。
　　 卡介菌多糖核酸的提取與分離:采用超聲波在低溫環(huán)境下破碎BCG的細(xì)胞壁，利用熱酚法去除菌體蛋白獲得BCG-PSN，用硫酸苯酚法檢測糖含量，紫外分光光度計測定其核酸含量。結(jié)果顯示，從BCG中提取BCG-PSN的提取率為1.06％。所得的BCG-PSN中多糖的含量占72.6％，核酸占23.5％。取1 g的B

4、CG-PSN經(jīng)DEAE-纖維素陰離子柱交換層析分離，得到0.615 g白色易溶于水的多糖及0.16 g淡黃色不易溶于水的核酸，經(jīng)鑒定多糖與核酸均得到較好的分離。
　　 體外抗病毒試驗:為探討卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)的抗病毒效果，將BCG-PSN作用于離體培養(yǎng)的雞胚成纖維(CEF)細(xì)胞，用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測BCG-PSN對CEF細(xì)胞活性的影響;用細(xì)胞病變法(CPE)檢測BCG-PSN對水皰口炎病毒(VSV)

5、的抑制作用，并在安全濃度范圍內(nèi)篩選BCG-PSN抑制VSV的最佳作用時間和最佳作用劑量。試驗結(jié)果表明，當(dāng)BCG-PSN質(zhì)量濃度大于800μg/mL時對CEF細(xì)胞均具有明顯的毒性作用;BCG-PSN能顯著抑制VSV在CEF細(xì)胞上的生長，但BCG-PSN對VSV的抑制作用并非隨著其劑量的增加和作用時間的延長而增強(qiáng)，144.0μg/mL的BCG-PSN在CEF細(xì)胞上作用24 h后，產(chǎn)生的抗病毒活性最強(qiáng)。BCG-PSN可誘導(dǎo)CEF細(xì)胞產(chǎn)生IFN