藍耳病毒RX株的分離鑒定和中藥體外抗病毒的作用研究.pdf

1、本研究通過設計PRRSV PCR特異性引物，利用RT-PCR方法對廣東地區(qū)某疑似暴發(fā)PRRS的豬場進行檢測，結果為PRRSV陽性。然后用Marc-145細胞對發(fā)病豬肺臟、淋巴結進行病毒分離。從肺臟中分離得到一株病毒命名為PRRSV RX株。試驗對分離病毒進行了鑒定，電鏡觀察結果可見胞漿內(nèi)散布大量呈球形的病毒粒子，直徑為40-60nm；病毒的TCID50為10-4.5/0.1 ml。病毒為RNA病毒；RX株經(jīng)56℃處理20-30min后喪

2、失對細胞的感染力；病毒培養(yǎng)的最佳PH值是6.8-7.0。病毒動物回歸試驗表明，分離病毒接種40日齡的仔豬，臨床表現(xiàn)體溫升高和一定程度的呼吸癥狀。 選用黃芪、板藍根、甘草、魚腥草、山楂和青蒿六種中草藥和為試驗藥物進行體外抗病毒試驗。中草藥采用傳統(tǒng)的水煮浸提法分別提取并濃縮成100mg/ml溶液作為原液，高壓滅菌處理備用。藥物原液倍比稀釋成不同濃度以測定其對Marc145細胞的毒性作用，來確定藥物的安全濃度。以安全濃度為準，稀釋成四

3、個不同濃度在Marc145細胞上做抗病毒試驗；采用三種作用方式：先加藥物后加病毒，先加病毒后加藥物，藥物與病毒先作用一段時間后加入，以CPE、病毒滴度和MTT法測得的OD值為觀測指標評價藥物抗PRRSV病毒的活性，以探討其抗病毒吸附、抗病毒復制或直接滅活病毒的作用方式。試驗結果如下： 各藥物對Marc145細胞的安全濃度分別為黃芪12.5 mg/mL、板藍根3.125 mg/mL、甘草3.125 mg/mL、山楂3.125 mg

4、/mL、魚腥草1.526 mg/mL、青蒿1.526 mg/mL。 所篩選藥物黃芪，板藍根，甘草，山楂，魚腥草，青蒿都具有抗病毒吸附作用而且保護作用均顯著；先加病毒后加藥物時，魚腥草的作用比較穩(wěn)定而板藍根在3.125 mg/mL，1.562 mg/mL保護率最高。藥物對病毒的殺滅作用時板藍根在3.125 mg/mL，1.562 mg/mL的作用比較明顯。不同藥物對同種細胞的毒性不一樣。 綜合三種加藥方式的效果考慮，板藍根