蒙古羊羊水源干細(xì)胞的分離鑒定及其定向成骨分化研究.pdf

1、本研究旨在分離鑒定蒙古羊羊水源干細(xì)胞（Amniotic fluid-derived stem cells，AFSC），并對(duì)其生物學(xué)特征及分化潛能進(jìn)行探究，為以 AFSC為種質(zhì)資源生產(chǎn)克隆羊、轉(zhuǎn)基因羊奠定理論基礎(chǔ)。
　　經(jīng)過培養(yǎng)不同孕期蒙古羊AFSC，發(fā)現(xiàn)羊水采集時(shí)間對(duì)AFSC的貼壁率及細(xì)胞活性影響較大，孕中期AFSC貼壁率比孕早期的高，細(xì)胞活性比孕晚期的強(qiáng)，采集AFSC的最佳時(shí)期為孕中期。
　　15％ FBS可維持孕中期蒙古

2、羊AFSC增殖50代以上，其形態(tài)及生物特性保持不變，細(xì)胞生長速度及增殖能力無明顯差異。
　　細(xì)胞培養(yǎng)初期，通過機(jī)械分離法，并有效配合胰蛋白酶消化時(shí)間，去除成纖維狀細(xì)胞中混雜的上皮樣細(xì)胞，可在5代之內(nèi)純化。純化的AFSC形態(tài)上為梭型，細(xì)胞匯合有方向性，集落呈典型渦旋狀排列。
　　利用RT-PCR檢測(cè)不同代數(shù)AFSC，結(jié)果表明蒙古羊AFSC表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)志基因Oct-4，Nanog，SH2，SSEA-1，CD117和HLA-A等。

3、
　　蒙古羊AFSC懸浮培養(yǎng)時(shí)，可形成典型的類胚體，并表達(dá)三胚層標(biāo)志基因fgf5(外胚層)、α-fetoprotein(內(nèi)胚層)和ζ-globin(中胚層)。
　　利用地塞米松、抗壞血酸、β-甘油磷酸鈉對(duì)蒙古羊AFSC誘導(dǎo)后細(xì)胞生長相對(duì)變緩，邊緣變模糊，局部出現(xiàn)復(fù)層生長，并形成顆粒狀結(jié)節(jié)。誘導(dǎo)三周后細(xì)胞堿性磷酸酶活性顯著增加，茜素紅染色呈紅色，表明誘導(dǎo)成功。
　　研究結(jié)果表明本試驗(yàn)從蒙古羊羊水中分離得到的細(xì)胞具有一定的