伏馬毒素B1免疫學(xué)檢測方法的研究.pdf

1、伏馬毒素(Fumonisins)是一種主要由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme)產(chǎn)生的具有毒性及致癌性的真菌毒素,通常存在于受此類真菌污染的玉米等糧食作物及其相關(guān)的食品和動物飼料中。該毒素能夠引起人畜多種疾病,嚴(yán)重威脅人類及動物的健康,因而越來越引起人們的關(guān)注。伏馬毒素有多種結(jié)構(gòu)類似物,其中伏馬毒素B1(Fumonisin B1,FB1)是污染糧食作物的主要成分,也是引發(fā)毒性的主要原因。本研究在制備完全抗原及抗FB1多

2、克隆抗體的基礎(chǔ)上,建立了針對FB1的間接競爭ELISA、化學(xué)發(fā)光ELISA及免疫膠體金快速檢測方法。由于FB1是一種不具備免疫原性的半抗原小分子,必須通過與載體蛋白的偶聯(lián)獲得免疫原性。首先以戊二醛法將半抗原FB1與載體蛋白鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)偶聯(lián)成為完全抗原KLH-FB1,KLH-FB1作為免疫原免疫新西蘭大白兔制備抗血清；以戊二醛法將半抗原FB1與另一種載體蛋白卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)成為完全抗原OVA-FB1,OVA-FB1作為包

3、被原進(jìn)行血清效價檢測及后續(xù)ELISA實驗。間接ELISA檢測血清效價,效價可達(dá)1：9600。用辛酸-硫酸銨法、Protein G親和層析法分別純化制備的多克隆抗體,結(jié)果表明Protein G親和層析法純化的多抗較純,抗體活性也較好。利用制得的抗FB1多克隆抗體,分別建立了間接競爭ELISA檢測方法與化學(xué)發(fā)光ELISA檢測方法。其中,間接競爭ELISA檢測在37℃包被4h,包被抗原0.5μg/mL,一抗稀釋度1：4000,二抗稀釋度1：6

4、000的條件下,檢測靈敏度為0.41ng/mL,檢測線性范圍為0.41-33.3ng/mL,與黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮等常發(fā)真菌毒素?zé)o交叉反應(yīng)?；瘜W(xué)發(fā)光ELISA檢測在包被抗原0.5μg/mL,一抗稀釋度1：5000,二抗稀釋度1：40000的條件下,檢測靈敏度為0.14ng/mL,檢測線性范圍為0.14-33.3ng/mL。利用兩種檢測方法同試劑盒檢測同時應(yīng)用于樣品的加標(biāo)回收實驗,檢測樣品回收率在各自線性范圍內(nèi)達(dá)到80%以上