2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩89頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、生物和非生物逆境脅迫因子(如病原侵害、干旱、高鹽和高低溫等)嚴重影響農(nóng)作物的生長發(fā)育以及產(chǎn)量和品質(zhì)。植物對脅迫應(yīng)答響應(yīng)是一個涉及基因、信號傳導(dǎo)途徑以及基因表達產(chǎn)物協(xié)同參與的過程,這個過程又分為到4個階段:植物對脅迫信號的感知、脅迫信號的傳遞、膜受體對脅迫信號的識別與傳導(dǎo)和相關(guān)抗逆基因的表達。在這其中,蛋白激酶是植物體內(nèi)一類重要的調(diào)節(jié)酶,通過膜受體感知外界環(huán)境脅迫信號,引起細胞內(nèi)一些離子和分子濃度改變,激活不同蛋白磷酸化途徑。而促分裂原活

2、化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK),它是普遍存在于真核生物中的一類保守的絲氨酸/蘇氨酸類蛋白激酶,在植物生長發(fā)育和多種生物、非生物脅迫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著關(guān)鍵作用。
  桑樹是一種對環(huán)境有極強的適應(yīng)性的多年生生態(tài)經(jīng)濟樹種,具有耐鹽堿、耐旱、耐澇和耐寒等多種特性。但其逆境生理、生化和分子生物學(xué)研究極少。關(guān)于桑樹抗性的研究主要集中在抗性種子資源的篩選及抗性生理指標(biāo)的測定,桑樹抗性基因

3、的研究并不多見。雖然MAPK在一些植物中已經(jīng)被鑒定并驗證功能,但是在公共數(shù)據(jù)庫(如NCBI,EMBL等)中沒有桑樹MAPK的相關(guān)報道。隨著川?;蚪M的完成,使在全基因組水平分析桑樹MAPK抗性基因家族成為可能,這對于探明MAPK脅迫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機理以及植物對生物和非生物脅迫適應(yīng)機制具有重要意義,為桑樹分子改良提供研究基礎(chǔ)。
  本研究基于川?;蚪M數(shù)據(jù)庫,利用生物信息學(xué)方法對預(yù)測的桑樹MAPK基因家族根據(jù)其氨基酸序列和保守基序進行

4、分類和系統(tǒng)發(fā)生分析,從中鑒定出47個桑樹MAPK(MnMAPK)家族基因:32個MnMAPKKK、5個MnMAPKK和10個MnMAPK基因。并對其中的10個MnMAPK基因的基因結(jié)構(gòu)、上游啟動子保守元件、氨基酸保守序列及與其他植物中MAPK蛋白序列進行系統(tǒng)進化分析;并對其克隆序列與川?;蚪M數(shù)據(jù)庫進行比對分析;以生長2個月(高度約25cm)的湖桑幼苗為材料,對其進行不同的脅迫(高溫,低溫,高鹽和干旱)和信號分子(ABA,SA,H2O2

5、和MeJA)處理,通過qRT-PCR分析桑樹MAPK基因在不同脅迫誘導(dǎo)條件下的表達情況;基于脅迫誘導(dǎo)表達譜篩選出候選的MnMAPK6基因進行亞細胞定位,構(gòu)建植物超量表達載體農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥,獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥植株,對轉(zhuǎn)基因擬南芥進行高溫,干旱,高鹽,H2O2等處理,觀察其對轉(zhuǎn)基因植株的生長發(fā)育和非生物脅迫耐受情況。本研究的主要研究結(jié)果如下:
  1、川桑MAPK基因家族生物信息學(xué)分析和克隆
  利用生物信息學(xué)方法在

6、川桑基因組中鑒定得到47個桑樹MAPKs家族基因:32個MnMAPKKK、5個MnMAPKK和10個MnMAPK基因。并對其中的10個MnMAPK基因的基因結(jié)構(gòu)、上游啟動子保守元件、氨基酸保守序列及與其他植物中MAPK蛋白序列進行系統(tǒng)進化分析,克隆了10個MnMAPK基因,序列驗證發(fā)現(xiàn)川?;蚪M數(shù)據(jù)庫中MnMAPK2比川桑cDNA中克隆得到的MnMAPK2全長cDNA缺失15個核苷酸堿基,MnMAPK8存在兩種剪接形式。MnMAPK基因

7、CDS大小介于1107 bp到1902 bp之間,它們編碼的蛋白質(zhì)大小范圍為368至633個氨基酸(aa),預(yù)測的蛋白質(zhì)分子量在42.4 kD和70.9 kD的之間,等電點大小介于5.0到9.28之間。通過桑樹MAPK氨基酸序列多重序列比與系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn),桑樹MAPK分布在A-E組。
  2、桑樹MAPK基因非生物脅迫誘導(dǎo)表達分析
  對川桑MAPK家族的10個基因設(shè)計qRT-PCR引物,以生長兩個月的湖桑32號幼苗為材

8、料,進行高溫、低溫、干旱、高鹽非生物脅迫處理和ABA、SA、H2O2和MeJA四種信號分子處理,提取對照組和處理組材料的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,檢測桑樹MAPK基因在脅迫處理條件下的表達情況。結(jié)果表明,桑樹MnMAPKs基因可以受到多種非生物脅迫的誘導(dǎo),不同的桑樹MAPK基因?qū)Σ煌拿{迫處理有不同的脅迫應(yīng)答模式。
  3、川桑MnMAPK6基因亞細胞定位與功能研究
  MnMAPK6在桑樹根、莖和葉三個組織在不同的非生物脅迫

9、和不同的時間段處理后的表達模式不同,可以響應(yīng)多種脅迫,暗示MnMAPK6參與了桑樹非生物脅迫響應(yīng)信號傳導(dǎo)途徑。
  構(gòu)建35 S-MnMAPK6∷ EGFP瞬時表達載體,同時構(gòu)建35S-EGFP表達載體作為對照,用農(nóng)桿菌侵染法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細胞,結(jié)果顯示MnMAPK6融合蛋白被定位在細胞核中。
  構(gòu)建MnMAPK6植物超量表達載體,浸花法轉(zhuǎn)化擬南芥并獲得轉(zhuǎn)基因植株。不同的過表達植株GUS的表達量不同,并且表現(xiàn)出一定的組織差異

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論