高效重組SpltMNPV的構建和篩選.pdf

1、斜紋夜蛾(Spedoptera litura)是一種雜食性農業(yè)和林業(yè)害蟲,國外主要分布于朝鮮、日本、印度、澳大利亞等國,在我國各省、市、自治區(qū)均有發(fā)生,其寄主范圍極廣,能夠危害109科389種寄主植物,是各種農作物和綠化植物的重要害蟲。盡管斜紋夜蛾核型多角體病(Spodoptera litura multicapsidnucleopolyhedroviruse,SpltMNPV)已在中國商品化并大規(guī)模用來控制棉花葉蟲,但它緩慢的殺蟲速度

2、、較窄的宿主范圍、對紫外線敏感等特點限制了其在全國范圍的推廣。因此,開發(fā)高效重組SpltMNPV殺蟲劑顯得R益迫切。SpltMNPV日本株(C3)(又命名為SpltMNPVⅡ)是Kamiya等從日本全國各地野外感病幼蟲收集、分離到189個SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力極強的一種新型病毒株。
　　 本研究在SpltMNPVⅡ的基礎上成功構建并篩選了egt缺失的,表達BmKITa1成熟肽的重組SpltMNPV,并測定其生物學活性

3、。主要成果包括：⑴運用分子克隆方法構建了重組轉移載體Psk-Δegt-Pph-egfp-Pph-BmK ITa1,載體質粒和SpltMNPVⅡ基因組DNA共轉染SpLi細胞,經(jīng)多輪熒光斑法和有限稀釋法相結合成功篩選出重組病毒SpltMNPV-Δegt—Pph-egfp-Pph-BmK ITa1,并測定其生物學活性。和野生型病毒相比,在病毒濃度為107 polyhedra/larva時,重組SpltMNPV-Δegt—Pph-egfp—P

4、ph-BmK ITa1的殺蟲速度提高了50％。⑵運用分子克隆方法構建了重組轉移載Psk—Δegt-Pph-egfp-ie-1-BmK ITa1,載體質粒和SpltMNPVⅡ基因組DNA共轉染SpLi細胞,經(jīng)多輪熒光斑法和有限稀釋法相結合成功篩選出重組病毒SpltMNPV-Δegt-Pph-egfp-ie-1-BmK ITa1,并測定其生物學活性。和野生型病毒相比,在病毒濃度為107 polyhedra/larva時,重組SpltMNPV