糖皮質激素對肉仔雞骨骼肌葡萄糖轉運的影響.pdf

1、為探討糖皮質激素對肉仔雞骨骼肌葡萄糖轉運的影響，本研究從活體入手，以外源導入糖皮質激素的方法，觀察肉仔雞骨骼肌內葡萄糖轉運載體的種類和葡萄糖轉運載體的變化情況；同時，以體外培養(yǎng)的成肌細胞為研究模型，分析引起葡萄糖轉運改變的因素并測定葡萄糖的轉運速率，為肉仔雞骨骼肌葡萄糖代謝紊亂和胰島素抵抗的發(fā)生提供一定的理論依據。
　　 選取0日齡體重相近的Arbor Acres 雄性肉雞72 只，隨機分為三個處理：地塞米松組（DEX）、對照組

2、（NC）和采食量配對組（PF）。7-13日齡，各組早8:00分別腹部皮下注射DEX或生理鹽水2mg/Kg。對照組與地塞米松組自由采食飲水，采食量配對組飼喂DEX組前一天的采食量。13日齡晚8:00 各處理空腹12小時，自由飲水后取樣。翅靜脈采血，分離血漿，冷凍保存；臀股二頭?。∕1.Biceps femoris，BF）、胸大?。∕1.
　　 Pectoralis major，PM）各2g 左右，液氮速凍，-80℃貯存。取全部胸腿

3、肌稱重，測定胸腿肌指數。結果表明，生產性能方面，處理7天后體重顯著降低，料重比顯著升高，表明糖皮質激素處理降低了肉仔雞的生產性能，胸腿肌指數變化不顯著；血液生化指標方面，處理7天后血漿尿酸、胰島素和血糖含量顯著上升；在對基因mRNA的檢測中，肉仔雞骨骼肌中發(fā)現GLUT1、GLUT3、GLUT8、GLUT11 與GLUT12蛋白的存在，同時并未發(fā)現GLUT4 類似蛋白的存在。
　　 試驗二，成肌細胞正常培養(yǎng),72h后去除胎牛血清，

4、無血清培養(yǎng)4h。（1）隨機分為4組：對照組（高糖無血清）、LY294002組（50uM LY294002）、Rapamycin組（5nMRapamycin）、地塞米松組（高糖無血清），1h后，后三組添加200nM DEX,3h后測定葡萄糖轉運速率。（2）隨機分為4組：對照組、胰島素組（高糖無血清）、RU486組（2uMRU486）、胰島素和地塞米松組（高糖無血清），1h后，后三組分別添加0.1U/ml INS 或200nM DEX+0.

5、1U/ml INS。3h后測定葡萄糖轉運速率。結果表明，（1）糖皮質激素顯著降低了2-DG的轉運速率，PI3K及mTOR 被阻斷后緩解了該抑制作用。（2）胰島素促進了2-DG的攝取，加入地塞米松后消除了胰島素對2-DG 攝取的促進作用，但差異并不顯著。
　　 試驗三，成肌細胞于DMEM 高糖培養(yǎng)液中添加10％胎牛血清,37℃，5％ CO2正常培養(yǎng),72h后去除胎牛血清，無血清培養(yǎng)4h。（1）隨機分為5組：對照組，后四組分別添加0

6、.2、1、5、25 U/ml的INS。處理3h，提取RNA。（2）隨機分為4組：對照組、地塞米松組（200nM DEX）、胰島素組（0.1U/ml INS）；胰島素與地塞米松組（200nM DEX，0.1U/ml INS）。處理12h，提取RNA。結果表明，（1）隨著胰島素濃度的升高，GLUT1，IR mRNA的相對表達量皆存在升高又降低的趨勢，0.2 U/ml 時表達量最高，隨后降低（2）
　　 只有GLUT1的mRNA 水平

7、受到胰島素處理后顯著升高，表現出胰島素敏感的特性。揭示GLUT1 在肉仔雞骨骼肌胰島素誘導的葡萄糖轉運的重要作用。
　　 試驗四，成肌細胞正常培養(yǎng),72h后去除胎牛血清，無血清培養(yǎng)4h。（1）隨機分為2組：高糖組（4.5 g/L GLU）、對照組（1 g/L GLU）。處理12h，提取RNA。（2）隨機分為2組：無糖組（0 g/L GLU），對照組（1 g/L GLU）。處理12h，提取RNA。結果表明，（1）高糖處理顯著升高了

8、GLUT1、GLUT3的mRNA 水平。對其它幾種轉運載體mRNA 水平無顯著影響。（2）無糖處理對所有五個蛋白的mRNA 水平無顯著影響，其中GLUT11 與GLUT12表達量非常低。由以上結果顯示GLUT1、GLUT3 在肉仔雞骨骼肌中可能受到血糖水平的調控。
　　 綜上所述，肉仔雞骨骼肌中GLUT1 所表現的胰島素敏感的特性及在糖皮質激素處理下含量的降低，可能在由糖皮質激素處理所導致的肉仔雞葡萄糖代謝的紊亂中起到了重要作用