桑樹內生拮抗細菌Burkholderia cepacia Lu10-1的抑菌機制及對家蠶病害的防治效果研究.pdf

1、家蠶細菌病和真菌病每年都給蠶桑生產造成嚴重的經(jīng)濟損失，現(xiàn)有藥物雖有較好的防治效果，但也存在一些缺點，如長期使用能夠使病原菌抗藥性增強，污染環(huán)境，有些藥物甚至對人有害等。為克服現(xiàn)有藥物的諸多限制性問題，開發(fā)新型微生物藥劑作為蠶藥是一個重要的研究方向。
　　 本實驗室從桑樹健康葉片中分離到一株內生菌Burkholderia cepaciaLu10-1，該菌株對桑炭疽病菌（Colletotrichum morifolium）、桑粘格孢

2、菌（Septogloeum mori）、楊樹水泡潰瘍病菌（Dothiorella gregaria）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）以及蘇蕓金芽孢桿菌（Bacillus thuringis）等多種動植物病原菌具有較強的拮抗作用，且能夠進入桑樹體內穩(wěn)定定殖，呈現(xiàn)出良好的開發(fā)前景。
　　 本研究通過形態(tài)觀察法和藥理實驗法兩種方法探討B(tài)urkholderiacepacia Lu10-1菌株對家蠶黑胸敗血菌

3、（Bacillus bombysepticus）和白僵菌（Beauveria bassiana）的抑菌機制，研究該菌株發(fā)酵上清液對家蠶黑胸敗血病和白僵病的防治效果，并探討其對家蠶生理及繭質的影響。主要研究結果如下：
　　 1測定了Lu10-1菌株抗菌粗提物對家蠶黑胸敗血菌的拮抗效果和最小抑殺菌濃度。結果表明：抗菌粗提物對黑胸敗血菌具有較強的拮抗作用，其抑菌圈直徑為18.20 mm；最小抑菌濃度（MIC）和殺菌濃度（MBC）分別為

4、1.56 mg/mL和3.13 mg/mL。
　　 2采用分光光度法、電導率法和SDS-PAGE分析等方法測定了Lu10-1菌株抗菌粗提物對黑胸敗血菌生長、胞外溶液電導率、胞內外總糖、胞內外蛋白質的影響。結果表明：經(jīng)抗菌粗提物處理后，黑胸敗血菌未出現(xiàn)對數(shù)生長期、細胞膜的滲透性發(fā)生改變、胞內糖和蛋白質發(fā)生滲漏、胞內分子量較大的蛋白出現(xiàn)降解現(xiàn)象。
　　 3采用掃描電鏡和透射電鏡分別觀察了Lu10-1菌株抗菌粗提物對黑胸敗血菌

5、菌體形態(tài)和結構的破壞情況。結果表明：抗菌粗提物能夠使黑胸敗血菌菌體破裂，細胞內容物流出，形成空腔，最后消融。表明抗菌粗提物的抑菌機制為破壞黑胸敗血菌的細胞壁或細胞膜。
　　 4測定了Lu10-1菌株抗菌粗提物對家蠶白僵菌的拮抗效果、對孢子萌發(fā)和菌絲的抑制作用。結果表明：抗菌粗提物對白僵菌具有較強的拮抗作用，其抑菌圈直徑為17.00 mm；抗菌粗提物可以有效的抑制白僵菌孢子的萌發(fā)和菌絲的生長。
　　 5采用光學顯微鏡、掃描

6、電鏡和透射電鏡分別觀察了Lu10-1菌株抗菌粗提物對白僵菌孢子、菌絲的形態(tài)和結構的破壞情況。光學顯微鏡觀察結果表明：抗菌粗提物作用于孢子后，孢子出現(xiàn)聚集、內容物分布不均、變形、空腔及胞壁斷裂等異常，作用于菌絲后，菌絲出現(xiàn)變粗、扭曲、皺褶、膨大、消融等現(xiàn)象；電鏡觀察結果表明：抗菌粗提物能夠使白僵菌孢子和菌絲的細胞質濃縮，質壁發(fā)生分離，細胞壁變薄、破裂，內容物流出，形成空腔。說明抗菌粗提物的抑菌機制為破壞白僵菌的細胞壁或細胞膜。