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文檔簡介
1、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)在添加柑桔果膠或羧甲基纖維素鈉鹽(CMC)的改良Marcus培養(yǎng)液中,可產(chǎn)生多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果膠甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、纖維素酶(Cx)、多聚半乳糖醛酸轉(zhuǎn)移消除酶(PGTE)和果膠甲基轉(zhuǎn)移消除酶(PMTE)等5種胞壁降解酶。其中,PG活性最高,酶活達(dá)249.11 U/mL。本研究通過丙酮和離心(4℃、8000r/min,15min),從病菌培養(yǎng)濾液中提取PG粗
2、蛋白。將PG粗蛋白依次經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析、Phenyl-Sepharose6 Fast Flow疏水層析和Sephadex G-75凝膠過濾層析,獲得具有較高活性的PG純化蛋白。該PG蛋白分子量為37.17kD,等電點為6.14;含有糖基,含糖量為2.51%,而不含脂類物質(zhì),是一種糖蛋白;蛋白部分不含芳香族氨基酸。經(jīng)測定,這種PG蛋白對高溫(≥40℃)不穩(wěn)定,100℃下水浴20min活性完全喪
3、失;pH3~11范圍內(nèi)均有活性,但pH5時活性最大;對紫外線、氯仿、胰蛋白酶和蛋白酶K均很敏感。
根據(jù)GenBank中核盤菌PG基因序列(AF501307和AY312510)特征分別設(shè)計引物,通過PCR技術(shù)獲得油菜菌核病菌兩個PG全長基因Sspgld和Sspg3。Sspgld大小為1084bp,推測含有2個內(nèi)含子,編碼326個氨基酸;Sspg3大小為1701bp,推測含有3個內(nèi)含子,編碼482個氨基酸。經(jīng)BLAST比對,S
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