無核金絲小棗果實(shí)無核機(jī)理的研究.pdf

1、分類號： S 魚魚5 ：L密 級： 公玨1 9 3 8 2 3 4單位代碼：學(xué) 號：1 0 0 8 6B 2 0 0 6 1 7無核金絲小棗果實(shí)無核機(jī)理的研究T h e S t u d y o nt h eS t o n e l e s sM e c h a n i s m o f Z i z i p h u s j u j u b aM i l l ．‘W u h e j i n s i x i a o z a o ’F r u i

2、t學(xué)位申請人：韓斌指導(dǎo)教師：彭建營教授學(xué)科專業(yè)：果樹學(xué)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)博士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一。年六月十三日摘要棗是我國特有果樹資源，在區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展中占有重要地位。在長期栽培過程中，棗產(chǎn)生了大量的遺傳變異，其中，不乏許多優(yōu)良品種和類型。棗是擬核果，大部分品種的果實(shí)有核，極個(gè)別品種無核，無核品種無論鮮食還是加工均很方便，無核是一個(gè)優(yōu)良性狀。無核金絲小棗是金絲小棗的果實(shí)無核自然突變體，除果實(shí)無核外，其枝葉形態(tài)和花果特點(diǎn)與金絲

3、小棗相同。本研究對棗果實(shí)無核機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。以無核金絲小棗和金絲小棗為試材，利用光學(xué)顯微鏡和透射電鏡觀察果核發(fā)育過程中果核細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)；測定果核發(fā)育的生理生化指標(biāo)及與其形成相關(guān)酶( P A L 、P O D 和P P O ) 活性；應(yīng)用c D N A - A F L P 技術(shù)，分析與果核相關(guān)基因的差異表達(dá)。開展棗果實(shí)無核機(jī)理的研究，對開發(fā)利用這一資源和用基因工程培育更優(yōu)良的無核棗品種奠定基礎(chǔ)。通過本論文的研究工作，得到

4、如下的結(jié)果：1 ．無核金絲小棗與金絲小棗果實(shí)發(fā)育的縱徑、核厚、核重的變化呈現(xiàn)雙S 曲線的的趨勢。無核金絲小棗果實(shí)橫徑發(fā)育呈單S 曲線的趨勢，而金絲小棗為雙S 曲線。在果實(shí)成熟時(shí)除縱徑二者差異不顯著外，果實(shí)橫徑、果種、核厚、核重，無核金絲小棗均顯著低于金絲小棗的相應(yīng)值。2 ．無核金絲小棗與金絲小棗果核發(fā)育均分為三個(gè)時(shí)期O P ：果核發(fā)育前期、果核發(fā)育中期、果核發(fā)育后期。3 ．無核金絲小棗果核發(fā)育的解剖學(xué)特征與金絲小棗的主要差異在于： (

5、1 ) 在果核發(fā)育中期無核金絲小棗果核的內(nèi)層和近內(nèi)層細(xì)胞停止分裂，細(xì)胞壁未木質(zhì)化仍為薄壁細(xì)胞；而金絲小棗果核細(xì)胞持續(xù)快速分裂，細(xì)胞壁木質(zhì)化成為厚壁細(xì)胞。( 2 )在果核發(fā)育后期無核金絲小棗果核細(xì)胞木質(zhì)化程度較金絲小棗低，與金絲小棗整個(gè)細(xì)胞被木質(zhì)填充不同，而是形成細(xì)胞壁木質(zhì)化的空腔，并且細(xì)胞間隙也為空的腔隙，切片觀察成篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)，這一構(gòu)造特點(diǎn)形成了無核金絲小棗果核薄而可食的優(yōu)良特性。4 ．無核金絲小棗只是在形態(tài)上殘存果核，與嚴(yán)格意義的無核不

6、同。果核細(xì)胞層數(shù)少，核層細(xì)胞的細(xì)胞壁木質(zhì)化程度低，果核薄成膜質(zhì)。5 ．在果核發(fā)育中期，無核金絲小棗果核內(nèi)酚類物質(zhì)的低含量，減緩了果核木質(zhì)素的合成速度。進(jìn)入果核發(fā)育后期，較低的木質(zhì)素含量降低了無核金絲小棗果核的木質(zhì)化程度。6 ．在果核發(fā)育的中期和后期，無核金絲小棗果核內(nèi)P A L 、P O D 和P P O 的活性均低于金絲小棗，降低了果核木質(zhì)素的合成速率。7 ．本研究建立了適合棗果實(shí)c D N A - A F L P 技術(shù)體系：在2 0

7、 皿酶切體系中，包括c D N A模板1 5 0 r i g ，N E B b u f f e r2 p L ，B S A ( 1 0 r a g ／m E ) 0 ．2 皿，E c o RI ( 大連寶生物公司) 3 U ，M s e I ( N E B 公司) 3 U ，加d d H 2 0 至2 0 p L ：3 7 ℃酶切5 h ；加上接頭，3 7 ℃連接1 0 h ( 或過夜) ；連接產(chǎn)物稀釋5 倍進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增；預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋l