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1、本文以水稻懸浮培養(yǎng)細(xì)胞為材料,研究磷脂酶C和磷脂酶D在木聚糖酶(Xylanase)誘導(dǎo)的水稻細(xì)胞抗病反應(yīng)中的作用。
我們用Xylanase(100μg/ml)處理繼代3-5天的水稻懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞濃度(0.05g/ml),發(fā)現(xiàn)PLDα和PLDβ的活性在處理初期都被迅速激活,并在1h內(nèi)達(dá)到峰值。但是PLDα的活性在2h時(shí)又再次被激活,出現(xiàn)第二個(gè)峰值,而后活性下降,趨于對(duì)照值;而PLDβ的活性在1h出現(xiàn)峰值后就不斷下降,甚至
2、低于對(duì)照值。在RT-PCR實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn),OsPLDα1的表達(dá)并沒(méi)有因?yàn)閄ylanase的處理而發(fā)生改變,與對(duì)照組表達(dá)水平基本一致,但是OsPLDβ1的表達(dá)量的變化和它的活性變化趨勢(shì)基本一致,在處理初期迅速表達(dá),而后逐漸下降。而OsPI-PLC1的表達(dá)卻是逐漸升高的趨勢(shì),在處理12h時(shí)明顯高于對(duì)照。
我們檢測(cè)了Xylanase處理?xiàng)l件下細(xì)胞中活性氧的情況,發(fā)現(xiàn)H2O2和O2的含量都發(fā)生了變化,H2O2出現(xiàn)了明顯的雙峰值,
3、而O2的積累量一直升高,但也能看出其產(chǎn)生速率有兩個(gè)峰值,基本都在1h和4h時(shí)。然后我們用不同濃度的PA處理細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)隨著濃度的升高,ROS的含量也在不斷的升高。這說(shuō)明Xylanase誘導(dǎo)的活性氧爆發(fā)與PLD和PLC的活性有關(guān)。隨后我們又反證,在處理前分別加入PLD的抑制劑1-Butanol和PLC的抑制劑Neomycin Sulfate,發(fā)現(xiàn)ROS爆發(fā)被抑制了。
利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)抗病基因PR10α和OsChit-1
4、的表達(dá)與PLD和PLC之間的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)XylanaSe能夠誘導(dǎo)PRIOα和OsChit-1的表達(dá),但是只有PR10α的表達(dá)與PLC和PLD有關(guān),PLC和PLD的活性被抑制后,PR10α的表達(dá)也降低,而OsChit-1的表達(dá)卻與PLC和PLD都沒(méi)有關(guān)系。
在過(guò)敏性細(xì)胞死亡和細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)中我們都發(fā)現(xiàn)PLD和PLC能夠調(diào)控Xylanase誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡和凋亡,PLD和PLC的活性被抑制后,細(xì)胞死亡和細(xì)胞凋亡都被緩解了。在檢測(cè)植
5、保素-櫻花素時(shí),發(fā)現(xiàn)1-Butanol能夠抑制Xylanase誘導(dǎo)的細(xì)胞中櫻花素的合成,而Neomycin Sulfate沒(méi)有抑制這種作用,說(shuō)明PLD參與并調(diào)控了植保素的合成。
綜上所述,Xylanase能夠誘導(dǎo)水稻細(xì)胞中PLDα和PLDβ的活性表達(dá),但是對(duì)基因OsPLDαl的表達(dá)沒(méi)有影響,而對(duì)OsPLDβ1和OsPI-PLC1的表達(dá)有誘導(dǎo)作用;PLD和PLC通過(guò)PA參與調(diào)控Xylanase誘導(dǎo)的水稻細(xì)胞中活性氧爆發(fā);PL
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