2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩48頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、豬囊尾蚴病是由豬帶絳蟲(Taenia Solium)幼蟲寄生于人或豬等中間宿主引起的人畜共患寄生蟲病。雖然傳統(tǒng)的驅(qū)蟲藥物在囊蟲病的治療方面仍發(fā)揮著重要的作用,但是長期、多次用藥因藥物殘留所致的食品安全問題直接影響著人體健康。這使得我們不得不改變思路,采用經(jīng)濟、安全、高效的疫苗防治該病的流行。豬囊尾蚴B抗原又叫副肌球蛋白,是由囊尾蚴體壁細胞產(chǎn)生并分泌到蟲體外的一種蛋白質(zhì),該抗原可通過抑制補體激活途徑,在囊尾蚴與宿主的免疫作用中對蟲體起保護

2、性作用,是WHO提出的血吸蟲疫苗候選抗原之一,是一種最有希望的蠕蟲疫苗候選抗原。
   本研究根據(jù)GenBank中登錄的AgB基因序列設(shè)計引物,利用RT-PCR技術(shù)從豬囊尾蚴總RNA擴增出AgB基因,連接到pGEM-T Easy載體并進行序列測定。結(jié)果表明,獲得的AgB基因完整的開放閱讀框(ORF)大小為2590bp,與GenBank中登陸的基因同源性達99.7%。同時,設(shè)計原核表達引物,以重組質(zhì)粒pGEM-AgB為模板進行PC

3、R擴增,經(jīng)EcoR I、Not I雙酶切,回收目的片段并與pGEX-4T-1載體連接,構(gòu)建原核表達載體pGEX-AgB,在大腸桿菌中進行表達及純化,表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測,結(jié)果在121ku處出現(xiàn)了清晰的目的蛋白條帶,與預(yù)期的分子量大小相一致,經(jīng)Western blot檢測發(fā)現(xiàn),表達產(chǎn)物能被豬囊尾蚴陽性血清所識別,說明表達的外源蛋白具有良好的免疫反應(yīng)性。
   設(shè)計哺乳動物表達載體引物,以重組質(zhì)粒pGEM-AgB為模板

4、,經(jīng)PCR擴增,BamHⅠ、Hind Ⅲ雙酶切后連接哺乳動物表達載體pVAX1,構(gòu)建重組質(zhì)粒pVAX1-AgB。大量提取重組質(zhì)粒,以100μg/只的劑量肌肉注射免疫5周齡健康BALB/c小鼠,同時設(shè)PBS和pVAX1質(zhì)粒對照組,在免疫后不同時間采血進行ELISA抗體檢測。結(jié)果顯示小鼠免疫后2w即可檢測到抗體,免疫后6 w達到高峰,且維持在一個較高水平,之后逐漸下降,38w后基本消失,抗體持續(xù)時間達8個月之久,而 PBS組和pVAX1對照

5、組則沒有檢測到抗體。
   為了進一步研究pVAX1-AgB重組質(zhì)粒的免疫效果,本實驗以pVAX1-AgB重組質(zhì)粒1000μg/頭的劑量經(jīng)肌肉免疫健康家豬,同時以AgB原核表達重組蛋白組(200μg/頭)、pVAX1組(1000μg/頭)和PBS組作為不同的對照組對該核酸疫苗進行全面評價,用ELISA測定各組的抗體水平,同時檢測血清中IL-4和IFN-γ的表達水平。結(jié)果顯示,pVAX1-AgB重組質(zhì)粒組免疫后第4w即檢測到抗體,

6、第8w達到峰值;AgB重組蛋白組免疫后的2w即可檢測到抗體,第6w達到峰值;pVAX1-AgB質(zhì)粒組抗體水平明顯低于AgB重組蛋白組。實驗豬一免后pVAX1-AgB質(zhì)粒組和AgB重組蛋白組IL-4、IFN-γ表達水平均升高,二免后又高于一免,兩次免疫后IL-4、IFN-γ水平明顯都高于免疫前(P<0.01);pVAX1-AgB質(zhì)粒組和AgB重組蛋白組的IL-4、IFN-γ表達水平無明顯差異,說明pVAX1-AgB重組質(zhì)粒和AgB重組蛋白

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論