用豆狀囊尾蚴囊液免疫動物的形態(tài)觀察及快速診斷方法的研究.pdf

1、兔豆狀囊尾蚴病是由豆狀帶絳蟲的中絳期豆狀囊尾蚴寄生于兔的肝臟、大網(wǎng)膜、腸系膜和腹腔內引起的一種多發(fā)常見的絳蟲病，但是目前還沒有活體診斷方法。為了建立一種快速診斷該病的血清學方法，本研究通過對試驗動物的免疫形態(tài)的研究和PVC-Dot-ELISA方法分別驗證豆狀囊尾蚴囊液蛋白的免疫原性和反應原性，即驗證豆狀囊尾蚴囊液蛋白可以作為免疫原的可行性。然后純化篩選囊液蛋白并進行鑒定。再通過免疫方法獲得小鼠陽性血清，建立阻斷 ELISA診斷方法。分別

2、用兔腦炎原蟲病、兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌病、兔弓形蟲病和球蟲病陽性血清，檢測其特異性。應用該檢測方法檢測兔血清臨床樣品，測定檢測率。
　　免疫形態(tài)研究結果表明，脾臟的脾小結明顯增多，生發(fā)中心發(fā)育明顯，動脈周圍淋巴鞘密集；回腸和腸系膜淋巴結的固有層內的T淋巴細胞和漿細胞明顯增多；鼠脾臟和回腸內有大量的陽性 T淋巴細胞和漿細胞，表明動物機體發(fā)生了不同程度的免疫反應。PVC-Dot-ELISA檢測結果表明六只小鼠均產(chǎn)生了有效效價。篩選

3、純化蛋白的結果表明用超濾離心管分離的大于50 kDa的囊液蛋白為最終純化蛋白，且該純化蛋白濃度很高，SDS-PAGE分析顯示，該目的蛋白分子量在63 kDa附近，與預期一致。建立的阻斷ELISA檢測方法結果顯示，純化囊液蛋白的最佳包被濃度為5μg/mL，一抗最佳稀釋度為1:800，最佳包被條件是4℃/過夜，最佳封閉條件為37℃/3h，二抗最佳稀釋比例和反應條件為1:5000，37℃，反應30min。特異性分析顯示建立的阻斷 ELISA檢