β干擾素的原核表達(dá)純化及其誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬的研究.pdf

1、β干擾素是一類屬于Ⅰ型干擾素的重要細(xì)胞因子，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多重活性。目前β干擾素主要應(yīng)用于多發(fā)性硬化的臨床治療，是FDA批準(zhǔn)的用于多發(fā)性硬化治療的唯一生物制品類藥物，也是目前治療多發(fā)性硬化最有效的藥物。由于具有抗腫瘤活性，β干擾素也經(jīng)常用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、前列腺癌、胰腺癌等惡性腫瘤的治療。由于β干擾素在體內(nèi)的半衰期很短（只有4-6小時(shí)），為了維持體內(nèi)有效的血藥濃度，需要多次用藥或采用蛋白質(zhì)長(zhǎng)效修飾技術(shù)延長(zhǎng)β干擾素的半衰

2、期。
　　本實(shí)驗(yàn)采用分子克隆方法構(gòu)建了β干擾素表達(dá)載體，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)宿主進(jìn)行異源表達(dá)，并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化;采用活化的多聚唾液酸對(duì)β干擾素進(jìn)行長(zhǎng)效化修飾，但得到的修飾產(chǎn)物不夠穩(wěn)定，很容易發(fā)生沉淀;因此我們采用分子遺傳操作將重組多肽XTEN與β干擾素進(jìn)行融合表達(dá)，最終獲得了重組蛋白，但其純化工作仍需進(jìn)一步研究。
　　由于β干擾素具有抗腫瘤活性，我們對(duì)β干擾素體外抑制人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用及機(jī)理進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

3、明:β干擾素可呈時(shí)間和劑量依賴性抑制人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞自噬;采用3-MA、氯喹等細(xì)胞自噬抑制劑或RNA干擾技術(shù)抑制細(xì)胞自噬，可增強(qiáng)β干擾素對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及細(xì)胞凋亡;而采用Z-VADfmk抑制細(xì)胞凋亡，又可削弱β干擾素誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬，說(shuō)明β干擾素誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬可能是人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)β干擾素引起的細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。此外，研究發(fā)現(xiàn)β干擾素誘導(dǎo)細(xì)胞自噬過(guò)程中有Akt/mTOR信號(hào)通路的抑制和