淫羊藿多糖的提取純化、化學(xué)修飾及抗NDV活性研究.pdf

1、新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）嚴(yán)重危害了各國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。目前國內(nèi)外均采用疫苗免疫接種進(jìn)行預(yù)防，尚無有效的治療藥物，而中藥多糖在治療新城疫疾病方面顯示出巨大的潛力。
　　 本試驗(yàn)在初步篩選出的具有抗新城疫病毒活性的中藥多糖的基礎(chǔ)上，以淫羊藿多糖（Epimediumpolysaccharide，EPS）為研究對象，開展了如下研究內(nèi)容：
　　 在單因素考察的基礎(chǔ)上，用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選EPS超聲提

2、取法和超聲協(xié)同酶提取法的提取條件，超聲提取法最優(yōu)提取條件為：時(shí)間為50min，物料比為1:20，溫度為60℃；在該條件下采用苯酚-硫酸法測得EPS的提取率為24.12％，含量為0.56％；超聲協(xié)同酶法所最優(yōu)提取條件為：酶含量0.210g，時(shí)間為30min，pH值為9，溫度為70℃，EPS提取率為45.23％，含量為1.06％。發(fā)現(xiàn)超聲協(xié)同酶提取法優(yōu)于超聲波提取法。比較了Sevag法、反復(fù)凍融法、反復(fù)凍融結(jié)合Sevag法三種除蛋白的效果，

3、選出最佳的方法是反復(fù)凍融結(jié)合Sevag法。用DEAEA-52分離EPS可以得到兩個洗脫峰。
　　 在對氯磺酸-吡啶體積比、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度單因素考察的基礎(chǔ)上，以SO42-含量和硫酸基取代度（DS）為指標(biāo)，正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選EPS的氯磺酸-吡啶法硫酸化修飾條件，所得最適硫酸化條件為：體積比為1:6，反應(yīng)時(shí)間為2.5h，反應(yīng)溫度為60℃；在該條件下所得多糖的SO42-含量為13.57％，DS為1.22。經(jīng)紫外光譜分析，在190～220n

4、m處有一強(qiáng)吸收峰，為多糖類物質(zhì)吸收峰，在250-275nm之間有明顯的-SO3的特征吸收峰。紅外光譜分析結(jié)果表明硫酸酯化是成功的，EPS和硫酸酯化淫羊藿多糖（sulfatedEPS，sEPS）均具有多糖母體的特征吸收峰，sEPS還有1259cm-1左右的S=O特征吸收峰和787cm-1左右的C-O-S特征吸收峰。
　　 體外細(xì)胞培養(yǎng)MTT法結(jié)果表明硫酸酯化后EPS的抗病毒活性有明顯的提高，尤其是先加多糖后加病毒和病毒多糖同時(shí)加入