一株嗜熱菌代謝產(chǎn)物增強鯉魚免疫力活性成分的研究.pdf

1、免疫增強劑又稱免疫促進劑是指單獨或同時與抗原使用均能增強機體免疫應答的物質，它可以提高動物機體的免疫機能及防病、抗病能力。免疫增強劑多為糖類和蛋白類成分，其來源包括動物、植物、微生物。
　　 本研究旨在篩選出具有免疫增強活性的菌株，并對該菌株發(fā)酵液中免疫增強活性成分進行分離、純化和鑒定，以期為將其作為免疫增強劑提供依據(jù)。主要試驗方法、步驟、結果如下：
　　 1、以分離自西安某溫泉的7株嗜熱菌為篩選對象，將試驗菌株進行發(fā)酵

2、培養(yǎng)，離心過濾，所得上清液濃縮制餌后投喂試驗鯉，每7d測定一次鯉外周血白細胞吞噬活性（Leucocyt phagocytic activity）、吞噬細胞殺菌活性(Phagocyt bactericidal activity)，以確定這7株細菌代謝產(chǎn)物對鯉是否具有免疫增強效果。試驗周期共28d。試驗結果表明：菌株XA-1和菌株XA-4兩組，鯉的以上二項指標與對照組相比均有較大程度提高，表現(xiàn)出較強的免疫增強活性(p＜0.05)。而其余各菌

3、株組，在本試驗條件下對鯉的免疫功能無顯著增強作用。根據(jù)各組菌株發(fā)酵液免疫增強效果以及菌的生長特性，本試驗選取菌株XA-1作為目標菌株，并對其進行了菌種的生理生化鑒定和分子生物學鑒定。結果表明，菌株XA-1隸屬于厭氧芽胞桿菌屬(Anoxybacillus)，種待定。
　　 2、對篩選得到的高活性菌株XA-1進行液體發(fā)酵，通過離心、過濾、真空冷凍干燥將發(fā)酵液濃縮后，分別用極性由小至大的4種有機溶劑（石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇）提取

4、所得濃縮物。將各提取物按等濃度等劑量分別注射鯉、并測定其白細胞吞噬活性、吞噬細胞殺菌活性、SOD活性、溶菌酶活性。根據(jù)上述4項免疫功能指標判定何種有機溶劑提取物中存在菌株免疫活性成分。結果表明，菌株免疫活性成分主要存在于甲醇提取物內(nèi)。
　　 3、將第二步所獲得的甲醇提取物浸膏進行分離、純化、活性檢測和化學結構鑒定。通過大孔吸附樹脂濃縮后、采用硅膠柱層析法對其進行分離，共獲得683個流分，后合并為5個流分組，并得到兩個較純的晶體化