柑橘潰瘍病防治藥劑的研究.pdf

1、本文針對柑橘潰瘍病對我國柑橘產業(yè)的嚴重危害,從植物源殺菌劑和化學殺菌藥劑兩個方面對柑橘潰瘍病菌的防治藥劑進行了室內研究。在抗菌植物活性篩選中,以采自廣西北部及桂東南地區(qū)的90個科共193種植物為篩選對象,植物材料經甲醇冷浸提取后,測定了193種植物提取物對柑橘潰瘍病菌的抗菌活性。在抗菌活性篩選的基礎上,進一步對抑制活性較高的2種中藥植物廣東蛇葡萄Ampelopsis cantoniensis(Hook. et Arn.) Planch.

2、和猴耳環(huán)Pithecellobium clypearia(Jack) Benth.進行抗菌活性成分分離,并鑒定出活性成分的結構,初步研究了兩種中藥植物對柑橘潰瘍病菌的抗菌作用機制。對目前生產上常用的14種殺菌藥劑進行了抑菌活性篩選,并將植物提取物與殺菌藥劑進行二元復配,初步研究了混配劑對柑橘潰瘍病菌的抑制活性。采用帶藥平板涂布法測定了193種植物提取物的抑菌活性。結果表明:在10mg/mL的質量濃度下,有15種植物提取物的抑菌活性好,7

3、2h能完全抑制柑橘潰瘍病菌的生長,它們分別是廣東蛇葡萄、猴耳環(huán)、楓楊、鉤吻、黔桂千金藤、廣西地不容、杠板歸、扁擔藤、桉、番石榴、細葉桉、厚皮香、老虎刺、大青和欖李;有金毛狗和山莓2種植物提取物48h完全抑制柑橘潰瘍病菌的生長;而24h完全抑制柑橘潰瘍病菌生長的植物提取物共計23種,分別為買麻藤、馬甲子、虎杖、水石榕、黃金鳳、中華獼猴桃、金線吊烏龜、木防己、野漆、鹽膚木、朝天罐、金錢柳、野鴨椿、四川大頭茶、細齒葉柃、木荷、長毛柃、油茶、嶺

4、南山竹子、紅背山麻桿、葉下珠、海漆和石菖蒲。在室內進一步測定了這15種植物提取物對柑橘潰瘍病菌的最低抑菌濃度(MIC)。發(fā)現廣東蛇葡萄和猴耳環(huán)提取物對柑橘潰瘍病菌的抑制活性最高,MIC均為2mg/mL;其次是楓楊、鉤吻、黔桂千金藤和廣西地不容提取物,MIC分別為6mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和8mg/mL;其余9種植物提取物的MIC均為10mg/mL。分別測定了廣東蛇葡萄枝和葉提取物以及猴耳環(huán)枝、葉和花提取物的抑菌活性,發(fā)現兩

5、種植物的活性成分在枝和葉中均有分布,且主要存在于葉中。其中,廣東蛇葡萄枝和葉提取物對柑橘潰瘍病菌的MIC分別為4mg/mL和2mg/mL;猴耳環(huán)枝、葉和花的MIC分別為4mg/mL、2mg/mL和4mg/mL。采用有機溶劑液-液萃取法將廣東蛇葡萄枝和葉提取物初步分成石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物4個部分,經活性測定,表明枝和葉抗菌活性成分均主要存在于乙酸乙酯萃取物中。廣東蛇葡萄乙酸乙酯萃取物經4次硅膠柱層析后獲得活

6、性流分2-11。同法對猴耳環(huán)枝和葉提物物進行了初步分離,將提取物初步分為石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物4個部分,經活性測定,發(fā)現猴耳環(huán)枝和葉抗菌活性成分均主要存在于乙酸乙酯萃取物中。通過反復硅膠柱層析和薄層層析,結合活性跟蹤,從猴耳環(huán)乙酸乙酯萃取物中分離獲得1個活性化合物,經核磁共振(NMR)和質譜(MS)解析,鑒定為沒食子酸甲酯。沒食子酸甲酯對柑橘潰瘍病菌的最低抑菌濃度為1mg/mL。對目前生產上常用的14種殺菌

7、藥劑進行室內抑菌活性篩選,采用帶藥平板涂布法測定了14種殺菌藥劑對柑橘潰瘍病菌的最低抑菌濃度(MIC)。在14種供試藥劑中,其中10種殺菌藥劑60％甲硫·異菌脲WP、80%代森錳鋅WP、72%農用鏈霉素SP、2%加收米SL、硫酸銅晶體、53.8%可殺得WDG、25%甲霜靈WP、64%殺毒礬WP、20%葉枯唑WP和58%甲霜·錳鋅WP對柑橘潰瘍病菌的MIC分別為10mg/mL、10mg/mL、2.5mg/mL、2.5mg/mL、0.625

8、mg/mL、0.3125mg/mL、0.3125mg/mL、0.1563mg/mL、0.1563mg/mL和0.0391mg/mL,抑制活性由高到低的順序依次為58%甲霜·錳鋅WP＞20%葉枯唑WP和64%殺毒礬WP＞25%甲霜靈WP和53.8%可殺得WDG＞硫酸銅晶體＞2%加收米SL和72%農用鏈霉素SP＞80%代森錳鋅WP和60%甲硫·異菌脲WP。另外4種藥劑50%敵克松WP、20%噻唑鋅SC、15%三唑酮WP和3%中生菌素WP對柑

9、橘潰瘍病菌的MIC均大于最大處理濃度10mg/mL(50倍液)、10mg/mL(20倍液)、2.5mg/mL(60倍液)和0.3125mg/mL(96倍液)。室內藥劑篩選表明,14種藥劑中,58%甲霜·錳鋅WP對柑橘潰瘍病菌的抑制活性最高,20%葉枯唑WP、64%殺毒礬WP、25%甲霜靈WP和53.8%可殺得WDG也具有很好的抑菌效果。在殺菌藥劑活性篩選基礎上,將2種抗菌活性植物提取物與4種抑制活性高的殺菌藥劑53.8%可殺得WDG、6

10、4%殺毒礬WP、20%葉枯唑WP和58%甲霜·錳鋅WP配制成一定質量比和系列濃度的混配劑,并對柑橘潰瘍病菌進行抑制活性測定。其中,抑菌活性較高的有4種混配劑,即廣東蛇葡萄:53.8%可殺得WDG(1:1)、廣東蛇葡萄:64%殺毒礬WP(1:1)、猴耳環(huán):53.8%可殺得WDG(1:1)和猴耳環(huán):64%殺毒礬WP(1:1)混配劑。采用活菌平板計數法和干重法分別測定了廣東蛇葡萄提取物、猴耳環(huán)提取物以及沒食子酸甲酯對柑橘潰瘍病病菌菌落生長和生