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文檔簡(jiǎn)介
1、錳為一種淺灰色過渡性金屬元素,在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛,如干電池、電焊條、農(nóng)用滅菌劑和化肥的制造與使用。錳也是一種主要的環(huán)境和工業(yè)污染物,過量攝入會(huì)對(duì)腦、肝、肺等產(chǎn)生不同程度的損害作用,其中神經(jīng)系統(tǒng)是錳毒性作用的主要靶器官。近年來,國(guó)內(nèi)外對(duì)錳的神經(jīng)毒性機(jī)制進(jìn)行了大量的研究,但主要集中在人和鼠,而對(duì)禽類的研究很少。本試驗(yàn)以原代培養(yǎng)的雞胚腦神經(jīng)元為研究對(duì)象,在含終濃度為0、1.5、2、2.5 mmol/L MnCl2的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24
2、 h,應(yīng)用流式細(xì)胞儀、原位末端標(biāo)記、DNA電泳分析、熒光染色、電子顯微鏡、實(shí)時(shí)定量PCR染料法等方法,從細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、DNA斷裂變化、氧化應(yīng)激、細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度、線粒體膜電位及CaM mRNA表達(dá)水平等方面,研究MnCl2誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化、生物學(xué)改變及可能的調(diào)控環(huán)節(jié),初步探討錳誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)元凋亡的機(jī)制。研究結(jié)果表明:
1.應(yīng)用尼氏體染色、AO/EB雙熒光染色、透射電鏡、DNA Ladder、TU
3、NEL法、流式細(xì)胞儀觀察不同濃度的MnCl2對(duì)雞胚腦神經(jīng)元的影響,結(jié)果表明MnCl2能誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生凋亡,且凋亡具有劑量依賴性。
2.錳能夠誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生氧化應(yīng)激,導(dǎo)致GSH含量降低,ROS生成增加,破壞機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)及清除自由基的功能,造成雞胚腦神經(jīng)元發(fā)生氧化損傷,這可能是錳誘導(dǎo)雞胚腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。
3.錳能夠使雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性和△ψm降低,導(dǎo)致
4、線粒體損傷和能量代謝障礙,證實(shí)MnCl2可能通過線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
4.錳中毒可使雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)[Ca2+]i升高,CaM基因mRNA表達(dá)量降低,鈣穩(wěn)態(tài)發(fā)生紊亂,提示鈣穩(wěn)態(tài)失衡在錳致雞胚腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡中起一定作用。
5.錳中毒可使雞胚腦神經(jīng)元內(nèi)α-syn基因mRNA表達(dá)量增加,提示錳的神經(jīng)毒性可導(dǎo)致α-syn發(fā)生變化。
綜上所述,錳中毒可導(dǎo)致雞胚腦神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)改變,抑制線粒體呼吸鏈復(fù)合物
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