瓜果腐霉代謝產(chǎn)物中除草活性物質(zhì)的初步分離.pdf

1、微生物除草劑因具有環(huán)境相容性好、安全性高等優(yōu)點(diǎn)而受到研究者的普遍關(guān)注。瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)屬于一種卵菌,寄主范圍較廣,可引起多種植物的猝倒病和瓜果腐爛病。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究中發(fā)現(xiàn),瓜果腐霉的粗毒素具有較強(qiáng)的除草活性。本研究以分離自黃瓜的瓜果腐霉PAC菌株為試驗(yàn)材料,對(duì)其液體培養(yǎng)的濾液和菌絲進(jìn)行了分離和純化,旨在獲得除草活性物質(zhì)。
　　 1.培養(yǎng)濾液粗提物分別選用不同比例的乙酸乙酯和石油醚混合液

2、作為展開(kāi)劑(V／V=4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4)進(jìn)行硅膠柱層析,每個(gè)比例按每50 mL收集為一個(gè)餾分,共收集20個(gè)餾分。莖葉處理和種子萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果顯示,兩種溶劑3:1時(shí)分離效果較好,其中餾分8對(duì)馬唐的抑制作用達(dá)到了3級(jí),對(duì)馬唐種子萌發(fā)的抑制作用為13.64％。
　　 2.對(duì)菌絲的乙酸乙酯粗提物進(jìn)行硅膠柱層析,分別用乙酸乙酯和石油醚混合液作為展開(kāi)劑(V／V=4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3

3、、1:4),每個(gè)比例按每50 mL收集為一個(gè)餾分,共收集20個(gè)餾分,莖葉處理和種子萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果顯示,乙酸乙酯和石油醚4:1時(shí)分離效果較好,其中餾分11對(duì)馬唐的抑制作用達(dá)到了3級(jí),對(duì)馬唐種子萌發(fā)的抑制作用為17.39％。
　　 3.對(duì)菌絲的甲醇粗提物進(jìn)行硅膠柱層析,分別用乙酸乙酯和石油醚混合液作為展開(kāi)劑(V／V=4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4),每個(gè)比例都是每50 mL收集為一個(gè)餾分,共收集20個(gè)餾分,莖葉

4、處理和種子萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果顯示,乙酸乙酯和石油醚1:4時(shí)分離效果較好,其中餾分4其對(duì)馬唐的抑制作用達(dá)到了5級(jí),對(duì)馬唐種子萌發(fā)的抑制作用為68.97％。
　　 4.石油醚和乙酸乙酯3:1洗脫后,再用2:1進(jìn)行梯度洗脫,每50 mL收集為一個(gè)餾分,共收集到40個(gè)餾分。生物測(cè)定結(jié)果表明,梯度洗脫得到的餾分21～24對(duì)供試雜草馬唐表現(xiàn)出了較強(qiáng)的活性,其對(duì)馬唐的生長(zhǎng)抑制作用均為4級(jí)。合并餾分21～24,以乙酸乙酯:石油醚2:l的混合液為展開(kāi)劑

5、進(jìn)行等度洗脫,每50 mL收集為一個(gè)餾分,共收集到20個(gè)餾分。生物測(cè)定結(jié)果表明,餾分3對(duì)馬唐有較強(qiáng)的抑制活性。
　　 5.HPLC分析發(fā)現(xiàn),該餾分主要含有3個(gè)組分,其保留時(shí)間分別為12.7 min、14.0 min和30.5 min。質(zhì)譜分析結(jié)果表明,保留時(shí)間為14.O min時(shí)的組分其可能的分子式為C24H35N3O3和C20H23N9O3,30.5 min時(shí)的組分可能的分子式為C22H25N6O4,C19H37N6O2和C2