利用點(diǎn)突變研究水稻OsARF的功能.pdf

1、生長(zhǎng)素在植物的生長(zhǎng)發(fā)育中起著重要的調(diào)控作用。生長(zhǎng)素主要通過改變生長(zhǎng)素響應(yīng)基因的表達(dá)水平來影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程。生長(zhǎng)素信號(hào)調(diào)控經(jīng)典的模型中包含了對(duì)具有轉(zhuǎn)錄抑制功能的AUXIN/INDOLE-3-ACETIC ACID(IAA)蛋白和轉(zhuǎn)錄因子AUXINRESPONSE FACTOR(ARF)蛋白的作用狀態(tài)與生長(zhǎng)素濃度的關(guān)系的闡述。IAA蛋白和ARF蛋白是通過C端的第三和第四結(jié)構(gòu)域相互作用的。
　　 本實(shí)驗(yàn)室篩選到一個(gè)根部結(jié)構(gòu)有多種

2、缺陷表型的半顯性突變體（Osiaa23），該突變體OsIAA23基因的第二結(jié)構(gòu)域的脯氨酸突變?yōu)榱涟彼?。隨后我們得到了一個(gè)Osiaa23的回復(fù)突變體Osiaa23R。經(jīng)過對(duì)OsIAA23基因的序列分析，我們發(fā)現(xiàn)Osiaa23R除了保持突變體Osiaa23第二結(jié)構(gòu)域的突變位點(diǎn)外，在第四結(jié)構(gòu)域出現(xiàn)了一個(gè)新的突變位點(diǎn)，167位的色氨酸變成了絲氨酸。因?yàn)镺sIAA蛋白和OsARF蛋白在第四結(jié)構(gòu)域都存在一個(gè)保守的色氨酸位點(diǎn)，我們提出了一個(gè)假設(shè)：色氨

3、酸位點(diǎn)在OsIAA蛋白和OsARF蛋白的相互作用中是不可缺少的，并利用酵母雙雜實(shí)驗(yàn)證明了這個(gè)假設(shè)。
　　 根據(jù)以上結(jié)果，我們?cè)O(shè)計(jì)了一系列載體來研究水稻中的不同的OsARF蛋白家族成員的功能。我們挑選了5個(gè)OsARF，對(duì)其蛋白第四結(jié)構(gòu)域的色氨酸位點(diǎn)進(jìn)行了定點(diǎn)突變，然后將已突變的cDNA連入以35S為啟動(dòng)子的PHB載體，最后將構(gòu)建完成的載體利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方式轉(zhuǎn)入Osiaa23突變體。通過觀察轉(zhuǎn)基因苗的表型，發(fā)現(xiàn)五種不同的Pr35s