利用點突變研究水稻OsARF的功能.pdf

1、生長素在植物的生長發(fā)育中起著重要的調控作用。生長素主要通過改變生長素響應基因的表達水平來影響植物的生長發(fā)育過程。生長素信號調控經(jīng)典的模型中包含了對具有轉錄抑制功能的AUXIN/INDOLE-3-ACETIC ACID(IAA)蛋白和轉錄因子AUXINRESPONSE FACTOR(ARF)蛋白的作用狀態(tài)與生長素濃度的關系的闡述。IAA蛋白和ARF蛋白是通過C端的第三和第四結構域相互作用的。
　　 本實驗室篩選到一個根部結構有多種

2、缺陷表型的半顯性突變體（Osiaa23），該突變體OsIAA23基因的第二結構域的脯氨酸突變?yōu)榱涟彼?。隨后我們得到了一個Osiaa23的回復突變體Osiaa23R。經(jīng)過對OsIAA23基因的序列分析，我們發(fā)現(xiàn)Osiaa23R除了保持突變體Osiaa23第二結構域的突變位點外，在第四結構域出現(xiàn)了一個新的突變位點，167位的色氨酸變成了絲氨酸。因為OsIAA蛋白和OsARF蛋白在第四結構域都存在一個保守的色氨酸位點，我們提出了一個假設：色氨

3、酸位點在OsIAA蛋白和OsARF蛋白的相互作用中是不可缺少的，并利用酵母雙雜實驗證明了這個假設。
　　 根據(jù)以上結果，我們設計了一系列載體來研究水稻中的不同的OsARF蛋白家族成員的功能。我們挑選了5個OsARF，對其蛋白第四結構域的色氨酸位點進行了定點突變，然后將已突變的cDNA連入以35S為啟動子的PHB載體，最后將構建完成的載體利用農(nóng)桿菌介導的方式轉入Osiaa23突變體。通過觀察轉基因苗的表型，發(fā)現(xiàn)五種不同的Pr35s