佩梅病的PLP1基因點(diǎn)突變的功能研究.pdf

1、目的：
　　 佩梅病(Pelizaeus-Merzbacherdisease，PMD)是一種罕見(jiàn)的X連鎖隱性遺傳的腦白質(zhì)彌漫性損害性疾病，其致病基因位于Xq22.2的蛋白脂蛋白（proteolipidprotein1，PLP1），PLP1基因改變包括PLP1基因重復(fù)突變、點(diǎn)突變和基因缺失，這些改變均可以導(dǎo)致髓鞘形成異常和（或）少突膠質(zhì)細(xì)胞的死亡，使得廣泛白質(zhì)區(qū)域髓鞘缺乏或減少，本組研究進(jìn)一步證明PLP1基因的點(diǎn)突變中的c.353

2、C＞G(p.T117R)c.467C＞T(p.T1561)c.517C＞T(p.P173S)c.623G＞T(p.G208V)c.646C＞T(p.P216S)c.709r＞G(p.F237V)A242V是佩梅病的致病突變。
　　 方法：
　　 對(duì)臨床診斷確診為佩梅病的患兒進(jìn)行基因診斷，篩選出新發(fā)的點(diǎn)突變，用分子克隆的方法克隆突變型質(zhì)粒，并用化學(xué)轉(zhuǎn)染的方法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入U(xiǎn)373MG細(xì)胞及M03.13細(xì)胞中，用MTT的方法觀察

3、突變型質(zhì)粒對(duì)U373MG細(xì)胞的細(xì)胞活性影響以及提取轉(zhuǎn)染入MO3.13細(xì)胞中的突變型質(zhì)粒的蛋白，用蛋白免疫印跡的方法觀察突變型質(zhì)粒的蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．野生型質(zhì)粒對(duì)U373MG細(xì)胞的細(xì)胞活性沒(méi)有影響，而突變型質(zhì)粒對(duì)U373MG細(xì)胞的細(xì)胞活性有不同程度的影響，其中c.353C>G(p.T117R)c.467C>T(p.T1561)c.623G＞T(p.G208V)c.646C＞T(p.P216S)c.70

4、9T＞G(p.F237V)A242V對(duì)U373MG細(xì)胞的細(xì)胞活性影響較大，而c.517C＞T(p.P173S)則對(duì)U373MG細(xì)胞的細(xì)胞活性影響較小。
　　 2.c.353C＞G(p.T117R)c.467C＞T(p.T1561)c.517C＞T(p.P173S)c.623G＞T(p.G208V)c.646C＞T(p.P216S)c.709T＞G(p.F237V)A242V突變型質(zhì)粒的蛋白表達(dá)均有不同程度的下降。