蓖麻毒素的提取、純化以及293a細(xì)胞在其毒性作用下的蛋白質(zhì)組學(xué)初步分析.pdf

1、以大規(guī)模分析蛋白質(zhì)作為主要研究?jī)?nèi)容的蛋白質(zhì)組學(xué)是功能基因組研究的主要內(nèi)容之一，蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)取得的重大進(jìn)步使細(xì)胞內(nèi)全蛋白的組成及其活動(dòng)規(guī)律的研究成為熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)以蓖麻籽為實(shí)驗(yàn)材料，采用硫酸銨沉淀法提取了蓖麻毒素粗毒，利用親和層析與凝膠過(guò)濾層析純化了蓖麻籽中的蓖麻毒素，并從細(xì)胞水平研究了蓖麻毒素的毒性作用以及純化后的蓖麻毒素與標(biāo)準(zhǔn)品在毒性方面的差異。同時(shí)應(yīng)用二維凝膠電泳、肽質(zhì)量指紋質(zhì)譜測(cè)定、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了純化后

2、的蓖麻毒素的毒性作用對(duì)293a細(xì)胞蛋白質(zhì)組的影響，并對(duì)誘導(dǎo)蛋白的類(lèi)型及其所對(duì)應(yīng)的功能進(jìn)行了分析。取得了以下研究結(jié)果：
　　 采用硫酸銨沉淀法提取了蓖麻毒素的粗毒，應(yīng)用Sepharose4B柱親和層析和Sephacryl S-200柱凝膠過(guò)濾層析對(duì)蓖麻毒素進(jìn)行了純化，SDS-PAGE鑒定表明純化后的蓖麻毒素達(dá)到了電泳純。
　　 用毒素標(biāo)準(zhǔn)品和自制毒素對(duì)293a細(xì)胞進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)，將毒素標(biāo)準(zhǔn)品和自制毒素稀釋為0.01μg/ml

3、、0.1μg/ml、1μg/ml、10μgml、100μg/ml5個(gè)濃度梯度，同時(shí)設(shè)置空白孔(未接種細(xì)胞)和對(duì)照組(未接種毒素)，結(jié)果表明無(wú)論是蓖麻毒素標(biāo)準(zhǔn)品還是自制蓖麻毒素.隨著攻毒濃度的提高，細(xì)胞存活率都呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；攻毒濃度從1μg/ml提高10ug/ml，無(wú)論是標(biāo)準(zhǔn)品還是自制毒素，細(xì)胞存活率都在該濃度范圍內(nèi)下降最大，并且自制蓖麻毒素的降幅比蓖麻毒素標(biāo)準(zhǔn)品的降幅略大。
　　 用濃度為1μg/ml的毒素對(duì)293a細(xì)胞攻毒，同