PRLR和STAT4基因多態(tài)性及其與牛生產(chǎn)性狀關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、本研究以966頭牛為樣本（包括3個(gè)品種：中國(guó)荷斯坦、魯西黃牛和渤海黑牛），通過(guò)PCR-SSCP，PCR-RFLP和DNA測(cè)序等方法檢測(cè)牛PRLR基因和STAT4基因中新的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）位點(diǎn)，并將發(fā)現(xiàn)的這些SNPs位點(diǎn)及其不同單倍型與牛的生產(chǎn)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析，篩查與奶牛產(chǎn)奶性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，為未來(lái)培育高產(chǎn)奶量、高乳蛋白及高乳脂率奶牛提供參考依據(jù)。
　　 一.PRLR基因多態(tài)性與牛生產(chǎn)性狀關(guān)聯(lián)性分析
　　 催

2、乳素受體（PRLR）在從催乳素到乳蛋白基因的信號(hào)通路中起著關(guān)鍵作用。它與催乳素結(jié)合后激活JAK2激酶，進(jìn)而使得STAT5轉(zhuǎn)錄因子磷酸化隨后結(jié)合到乳蛋白基因啟動(dòng)子的識(shí)別序列上。因此，PRLR可作為奶牛乳蛋白量和乳蛋白率的候選基因。
　　 本試驗(yàn)在PRLR基因中發(fā)現(xiàn)了12個(gè)SNPs位點(diǎn)，其中42054A>G突變產(chǎn)生了TasⅠ的識(shí)別位點(diǎn)，通過(guò)PCR-RFLP方法酶切分成AA，AG和GG三種基因型。在中國(guó)荷斯坦牛群體中，AG基因型為優(yōu)勢(shì)

3、基因型，而在魯西黃牛和渤海黑牛中，GG基因型為優(yōu)勢(shì)基因型。另一個(gè)42275C>T多態(tài)位點(diǎn)可被MspⅠ識(shí)別產(chǎn)生三種基因型CC，TC和TT。在中國(guó)荷斯坦牛中，CC為優(yōu)勢(shì)基因型，而在魯西黃牛和渤海黑牛中，TT為優(yōu)勢(shì)基因型。這2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)在所研究的3個(gè)群體中均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)（P>0.05）。
　　 將檢測(cè)的793頭中國(guó)荷斯坦奶牛的這兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與產(chǎn)奶性狀進(jìn)行了相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)其對(duì)產(chǎn)奶性狀均沒(méi)有顯著影響。進(jìn)一步

4、地單倍型分析表明：在構(gòu)建的8種單倍型中，AACC單倍型個(gè)體的乳脂率顯著高于AGCC、AGTC和GGTC個(gè)體（P<0.05），因此，AACC單倍型個(gè)體所生的后代其乳成分高的可能性更大，可作為選育的單倍型分子標(biāo)記。
　　 二.STAT4基因多態(tài)性與牛生產(chǎn)性狀關(guān)聯(lián)性分析
　　 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4（STAT4）在乳蛋白基因的表達(dá)和乳腺發(fā)育中起著重要作用。本試驗(yàn)通過(guò)與相關(guān)的序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)了4個(gè)新的SNPs位點(diǎn)（g.62624

5、A>Css175327225，g.60330A>G ss175327226，g.63823G>C ss175327227和g.66912C>Tss175327228）。4個(gè)位點(diǎn)中，有2個(gè)（g.62624A>C和g.63823G>C）沒(méi)有在所研究的三個(gè)品系中檢測(cè)到。通過(guò)PCR-RFLP方法，突變位點(diǎn)g.60330A>G ss175327226由內(nèi)切酶MspⅠ識(shí)別切成三種基因型AA，AG和GG。另一個(gè)位點(diǎn)g.66912C>T ss17532

6、7228通過(guò)PCR-SSCP方法僅檢測(cè)到兩種基因型CC和TC。
　　 g.60330A>G位點(diǎn)的等位基因頻率在牛的3個(gè)品種中存在差異。將檢測(cè)的793頭中國(guó)荷斯坦奶牛的STAT4基因的多態(tài)性位點(diǎn)與產(chǎn)奶性狀進(jìn)行了相關(guān)性分析。g.60330A>G多態(tài)位點(diǎn)對(duì)奶牛的305天成年產(chǎn)奶當(dāng)量和乳脂率具有顯著性影響（P<0.05），但與乳蛋白率、乳脂量和乳蛋白量沒(méi)有相關(guān)性（P>0.05）。然而，g.66912C>T多態(tài)位點(diǎn)與產(chǎn)奶性狀沒(méi)有顯著相關(guān)性

7、（P>0.05）。因此，STAT4基因的g.60330A>G突變可作為一種分子標(biāo)記以區(qū)別多種群體，并在牛的育種計(jì)劃中用于產(chǎn)奶量和乳脂率的選擇。
　　 g.60330A>G和g.66912C>T多態(tài)位點(diǎn)單倍型分析表明：共構(gòu)建出6種單倍型，AATC和AACC單倍型個(gè)體的乳脂率顯著高于AGCC單倍型組合個(gè)體（P<0.05）；AGTC單倍型個(gè)體的乳蛋白率顯著高于AGCC單倍型組合個(gè)體（P<0.05）；AGCC單倍型個(gè)體的305 d成年產(chǎn)