海分枝桿菌(Mycobacter I um marinum)的分離鑒定及其抗原性研究.pdf

1、本文主要工作如下：
　　 1.本研究從帶菌狀態(tài)的黑解粘液、背鰭等部位分離到菌株FZ09，其生理生化特性與海分枝桿菌Rl相同，并且將兩株菌同時進行人工感染黑鰓的實驗，黑裙發(fā)病率為0。海分枝桿菌屬于條件致病菌，不容易引發(fā)正常組織病變，而保留在正常組織中，部分水產(chǎn)動物尤其是一些硬棘類動物，其感染海分枝桿菌后可以不發(fā)病，處于帶菌狀態(tài)。這種攜帶海分枝桿菌感染而不發(fā)病死亡的硬棘水產(chǎn)動物往往是感染軟棘魚類甚至是人類的罪魁禍首。
　　

2、2.本研究利用HPLC技術與生理生化及PCR技術共同鑒定出分離的菌株FZ09為海分枝桿菌，表明研究結果的準確性。實驗發(fā)現(xiàn)分枝菌酸指紋圖譜鑒定技術的穩(wěn)定性、重復性很高，為分枝桿菌的鑒定提供了更為可靠準確的方法。
　　 3.用不同碳源成分的培養(yǎng)基培養(yǎng)海分枝桿菌FZ09四周，菌落生長結果顯示:與Na2C03,Tween80,Tween20相比，甘油是最好的碳源成分，可以促進海分枝桿菌生長旺盛。Tween80對菌株的快速鑒定有一定優(yōu)勢。

3、海分枝桿菌對于有機碳源的選擇與結核分枝桿菌存在區(qū)別。
　　 4.用海分枝桿菌FZ09的全菌細胞免疫鼠制備抗血清，ELISA方法測得血清抗體效價為6400，說明菌株FZ09具有很強的抗原性，能夠有效地刺激鼠產(chǎn)生免疫應答。經(jīng)IFA'I，檢測發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)Z09的抗血清能夠與分枝桿菌屬的其它細菌發(fā)生交叉反應，與非分枝桿菌屬細菌則沒有交叉，表明該血清是檢測分枝桿菌免疫學特征的有效工具。
　　 5.28℃及34℃培養(yǎng)的細菌蛋白條帶分布相

4、同，主要有:97kDa,84kDa,56kDa,50kDa,45kDa,35kDa,28kDa,23kDa,19kDa,11kDaoWestern-blot分析顯示其中僅有1條45kDa蛋白條帶具有良好的抗原性。蛋白等電點在雙向電泳圖譜上的偏酸性端，分布范圍在pH4.5-5.5。而37℃培養(yǎng)時的蛋白條帶明顯減少，缺少的主要條帶有:23kDa、19kDa,11kDa，并且沒有抗原免疫蛋白帶，蛋白等電點分布區(qū)域減少。45kDa蛋白可能與海分

5、枝桿菌的致病性有關，而37℃條件下，海分枝桿菌可能改變了細胞結構，失去原有的抗原性及致病特點。
　　 6.3種不同方法提取的脂多糖經(jīng)電泳銀染后，有多條相同條帶，主要是在14kDa,16kDa及23kDa分子量處形成了幾條較為清晰的條帶，Western-blot及間接ELISA實驗結果顯示提取物與抗血清結合部位主要為核心多糖成分。類脂A部分由于分子量較大，所帶電荷的原因不容易跑開，聚集在凝膠上部，核心多糖由于分子量較小則快速遷移至

6、膠的底部，多糖側鏈根據(jù)分子量的大小依次分布，但多糖鏈不明顯。這3條蛋白帶可以為海分枝桿菌亞單位疫苗的開拓提供參考。
　　 7.進行血清學檢測時發(fā)現(xiàn)海分枝桿菌對腹腔注射組的昆明鼠具有感染能力，其肝臟出現(xiàn)肉芽腫;以細菌脂多糖作為反應底物的敏感度要明顯高于細菌全菌，而且各感染組都表現(xiàn)為明顯的陽性結果;其次，昆明鼠各感染組的值要顯著高于大鼠各組，表明該菌株對小鼠的感染比大鼠強三種方法提取的脂多糖檢測病原血清的敏感性不同，脂多糖1的敏感性